體外擴(kuò)增的造血干／祖細(xì)胞具有廣泛的臨床應(yīng)用，包括造血干細(xì)胞移植、基因治療、免疫治療以及制備成熟的血細(xì)胞來(lái)輸注人體。人臍帶血能夠給細(xì)胞移植治療和再生醫(yī)學(xué)提供大量的優(yōu)質(zhì)造血細(xì)胞。但是來(lái)自單份臍帶血的造血干／祖細(xì)胞數(shù)量十分有限，極大地限制了臍帶血在重建成人造血機(jī)能中的應(yīng)用。因此，迫切需要發(fā)展體外擴(kuò)增體系來(lái)大規(guī)模擴(kuò)增造血干／祖細(xì)胞。靜態(tài)培養(yǎng)體系，如組織培養(yǎng)瓶等，具有許多局限性，已被證明不適合大規(guī)模擴(kuò)增造血干／祖細(xì)胞。因此，需要發(fā)展生物反應(yīng)器技術(shù)來(lái)促進(jìn)造血干／祖細(xì)胞的體外大規(guī)模擴(kuò)增。先進(jìn)的生物反應(yīng)器可以改善靜態(tài)培養(yǎng)體系存在的傳質(zhì)限制，能夠較好地保持培養(yǎng)體系的穩(wěn)定。本研究利用旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器（rotating wall vessel，RWV），并采用適合的培養(yǎng)模式，如單純懸浮培養(yǎng)以及微膠囊化基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的方法來(lái)體外大規(guī)模擴(kuò)增人臍帶血來(lái)源的造血干／祖細(xì)胞。另外，本研究還建立了靜態(tài)以及RWV動(dòng)態(tài)微囊化共培養(yǎng)模式的數(shù)學(xué)模型，來(lái)模擬微囊化共培養(yǎng)體系的傳質(zhì)代謝問(wèn)題。首先，臍帶血單個(gè)核細(xì)胞被單獨(dú)培養(yǎng)在RWV生物反應(yīng)器和組織培養(yǎng)瓶中，使用含有血清和較低劑量外源生長(zhǎng)因子組合（5.33ng／ml IL-3，16... 

【文章來(lái)源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：183 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 干細(xì)胞
    1.2 造血干細(xì)胞及其應(yīng)用
        1.2.1 造血干細(xì)胞的定義以及分類(lèi)
        1.2.2 造血干細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)育
        1.2.3 造血干細(xì)胞的主要表面標(biāo)志
        1.2.4 造血干細(xì)胞移植
        1.2.5 造血干/祖細(xì)胞的其他應(yīng)用
    1.3 造血干/祖細(xì)胞體外培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.3.1 影響造血干/祖細(xì)胞體外培養(yǎng)的主要因素
        1.3.2 造血干/祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式研究進(jìn)展
        1.3.3 生物反應(yīng)器擴(kuò)增造血干/祖細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.4 海藻酸鈉生物微膠囊的研究進(jìn)展
        1.4.1 微膠囊
        1.4.2 海藻酸鈉微膠囊
        1.4.3 海藻酸鈣微膠珠
    1.5 本研究的選題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容
2 臍帶血造血干/祖細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器中的擴(kuò)增
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 試劑及藥品
        2.2.2 儀器設(shè)備
        2.2.3 方法
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 pH值和滲透壓
        2.3.2 總有核細(xì)胞擴(kuò)增
+細(xì)胞以及CFU-GM的擴(kuò)增">        2.3.3 CD34⁺細(xì)胞以及CFU-GM的擴(kuò)增
        2.3.4 培養(yǎng)過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的濃度
    2.4 對(duì)比和展望
    2.5 小結(jié)
3 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的微囊化培養(yǎng)
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        3.2.1 儀器設(shè)備
        3.2.2 試劑及藥品
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
        3.3.2 海藻酸鈣微膠珠
        3.3.3 兔骨髓間充南干細(xì)胞的微囊化培養(yǎng)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
        3.4.2 海藻酸鈣微膠珠
        3.4.3 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的微囊化培養(yǎng)
    3.5 討論
4 靜態(tài)下微囊化基質(zhì)細(xì)胞支持造血干/祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        4.2.1 儀器設(shè)備
        4.2.2 試劑及藥品
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.4 臍帶血
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 微囊化兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備
        4.3.2 含有兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的微膠珠的強(qiáng)度檢驗(yàn)
        4.3.3 臍帶血單個(gè)核細(xì)胞的分離
        4.3.4 微囊化靜態(tài)共培養(yǎng)
        4.3.5 總有核細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.3.6 流式CD34分析
        4.3.7 集落形成能力檢測(cè)
        4.3.8 靜態(tài)共培養(yǎng)期間微囊化兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子的定量檢測(cè)
        4.3.9 靜態(tài)共培養(yǎng)體系中葡萄糖和乳酸濃度的測(cè)定
        4.3.10 靜態(tài)共培養(yǎng)后微囊化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的死活檢測(cè)
        4.3.11 統(tǒng)計(jì)方法
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 海藻酸鈣微膠珠的強(qiáng)度檢測(cè)
        4.4.2 臍帶血單個(gè)核細(xì)胞和微囊化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的短期體外靜態(tài)共培養(yǎng)
5 旋轉(zhuǎn)壁式生物反應(yīng)器中微囊化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞支持造血干/祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        5.2.1 儀器設(shè)備
        5.2.2 試劑及藥品
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.4 臍帶血
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 臍帶血單個(gè)核細(xì)胞的分離
        5.3.2 ACA微膠囊的強(qiáng)度檢驗(yàn)
        5.3.3 RWV生物反應(yīng)器
        5.3.4 RWV反應(yīng)器內(nèi)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞和微囊化間充質(zhì)干細(xì)胞的短期共培養(yǎng)
        5.3.5 pH和滲透壓檢測(cè)
        5.3.6 總有核細(xì)胞計(jì)數(shù)
        5.3.7 流式CD34分析
        5.3.8 集落形成能力檢測(cè)
        5.3.9 葡萄糖、乳酸的測(cè)定
        5.3.10 動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)后微囊化間充質(zhì)干細(xì)胞的活性
        5.3.11 數(shù)據(jù)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 ACA微膠囊的強(qiáng)度檢驗(yàn)
        5.4.2 臍帶血單個(gè)核細(xì)胞和微囊化間充質(zhì)干細(xì)胞的短期動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
6 造血干/祖細(xì)胞與微囊化基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的傳質(zhì)數(shù)學(xué)模型
    6.1 前言
    6.2 微囊化共培養(yǎng)模式傳質(zhì)代謝模型的建立與計(jì)算
        6.2.1 模型的建立
    6.3 計(jì)算結(jié)果與討論
        6.3.1 靜態(tài)共培養(yǎng)模擬計(jì)算
        6.3.2 動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)模擬計(jì)算
    6.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
創(chuàng)新點(diǎn)摘要
英文縮略語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
附錄A
附錄B
附錄C
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3049431