背景 根據(jù)流行病學(xué)資料，乙肝病毒攜帶者目前在世界約有2.2億，在我國(guó)為1.2億左右，約占全國(guó)人口的10％。HBV具有嚴(yán)格的嗜肝特異性，但是科學(xué)家們?cè)诟瓮饨M織和細(xì)胞如胰臟、腎臟、皮膚、心臟、骨髓、淋巴細(xì)胞甚至男性生殖細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)HBV以游離和／或整合的方式存在。機(jī)體細(xì)胞內(nèi)HBV的存在可導(dǎo)致持續(xù)感染；HBV DNA整合可誘發(fā)多種染色體畸變；若突變激活癌基因，有可能誘發(fā)癌變。由于該病危害性大，流行面廣，因此其傳播途徑、發(fā)病機(jī)理及診療手段的研究一直是各國(guó)政府和科學(xué)家們高度重視的課題。 目的與意義 由于T淋巴細(xì)胞在機(jī)體清除HBV急慢性感染中發(fā)揮重要作用，而HBV DNA整合到精、卵細(xì)胞染色體上，有可能在親嬰間進(jìn)行垂直傳播，因此進(jìn)一步研究患者淋巴細(xì)胞與精、卵細(xì)胞內(nèi)HBV DNA的存在與整合，無(wú)論是對(duì)乙肝病毒的基礎(chǔ)理論研究還是臨床防治實(shí)踐都具有重要意義。 材料與方法 材料：①慢性乙肝患者外周血淋巴細(xì)胞與精子樣本；②小鼠卵母細(xì)胞；③pBR322-HBV DNA質(zhì)粒。方法：①用PCR與電泳技術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞和精子樣本中是否存在HBV DNA；②進(jìn)行外周血培養(yǎng)制備淋巴細(xì)胞染色體，用熒光原位雜交技術(shù)... 

【文章來源】：汕頭大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 乙肝病毒DNA在人淋巴細(xì)胞與精子中的存在與整合
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 HBV DNA的轉(zhuǎn)化、提取、鑒定和定量
            2.2.2 HBV DNA在人淋巴細(xì)胞與精子DNA中的存在
                2.2.2.1 淋巴細(xì)胞和精子DNA的提取
                2.2.2.2 淋巴細(xì)胞和精子DNA的PCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 HBV DNA在人淋巴細(xì)胞染色體上的整合
                2.2.3.1 外周血培養(yǎng)及淋巴細(xì)胞染色體的制備
                2.2.3.2 熒光原位雜交探針的制備
                2.2.3.3 熒光原位雜交探針純化和測(cè)定
                2.2.3.4 淋巴細(xì)胞染色體與HBV DNA探針FISH實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 HBV DNA的鑒定和定量結(jié)果
        3.2 乙肝患者淋巴細(xì)胞和精子DNA的PCR結(jié)果
        3.3 熒光原位雜交探針的定量結(jié)果
        3.4 淋巴細(xì)胞染色體與HBV DNA探針FISH結(jié)果
    4 討論
        4.1 HBV DNA在淋巴細(xì)胞中的存在與整合
        4.2 HBV DNA在人精子DNA中的存在
        4.3 淋巴細(xì)胞與精子樣本HBV DNA檢測(cè)結(jié)果比較分析
        4.4 創(chuàng)新與不足
        4.5 展望
第二部分 乙肝病毒DNA在小鼠卵母細(xì)胞中的存在與整合
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 卵母細(xì)胞超排
            2.2.2 卵母細(xì)胞與HBV DNA共培養(yǎng)
            2.2.3 HBV DNA在卵母細(xì)胞DNA中的存在
                2.2.3.1 卵母細(xì)胞中HBV DNA的提取
                2.2.3.2 斑點(diǎn)和Southern雜交探針的制備
                2.2.3.3 洗液樣本的斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)
                2.2.3.4 卵母細(xì)胞DNA的PCR實(shí)驗(yàn)
                2.2.3.5 PCR產(chǎn)物Southern雜交實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 HBV DNA在卵母細(xì)胞染色體上的整合
                2.2.4.1 卵母細(xì)胞染色體的制備
                2.2.4.2 卵母細(xì)胞染色體與HBV DNA探針FISH實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 洗液斑點(diǎn)雜交結(jié)果
        3.2 卵母細(xì)胞DNA的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3 卵母細(xì)胞DNA擴(kuò)增產(chǎn)物Southern結(jié)果
        3.4 卵母細(xì)胞染色體與HBV DNA探針FISH結(jié)果
    4 討論
        4.1 HBV DNA在卵母細(xì)胞DNA中的存在
        4.2 HBV DNA在卵母細(xì)胞染色體上的整合
        4.3 創(chuàng)新與不足
        4.4 展望
            4.4.1 肝病毒基因母嬰垂直傳播新途經(jīng)的研究
            4.4.2 以卵母細(xì)胞作載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究
    5 全文小結(jié)
    6 參考文獻(xiàn)
附錄1: 主要縮略語(yǔ)
附錄2: 主要混合液及培養(yǎng)基
綜述
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒的父兒傳播與肝外定位[J]. 王珊珊,姜普林,彭桂福,曾年華,王志斌.  中華肝臟病雜志. 1999(04)
[2]乙型肝炎病毒對(duì)精子染色體的影響[J]. 黃建民,黃天華,邱煥英,邱杰文,方小武,陳曉紅,莊天罡,蔡樹深,王永華,劉鴻禧,楊風(fēng)霞,劉衛(wèi)東.  癌變.畸變.突變. 1999(02)
[3]乙型肝炎病毒感染經(jīng)精子傳播的可能性研究[J]. 趙連三,劉曉松,張智翔,王錦蓉,劉麗,雷秉鈞.  中華傳染病雜志. 1998(03)
[4]HBV感染的單核細(xì)胞分泌TNFα和PGE2的改變及其意義探討[J]. 光麗霞,顧長(zhǎng)海.  中華傳染病雜志. 1995(04)
[5]乙型肝炎病毒父嬰傳播途徑的初步研究[J]. 張麗云,方之勛,鄭兆,劉新鈺,龔希平,吳玉祥.  中華傳染病雜志. 1994(04)
[6]乙型肝炎病毒與肝細(xì)胞癌變[J]. 琦祖和.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 1993(04)



本文編號(hào)：3046258