人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）潛伏感染的形成與AP-1家族蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用密切相關。為研究AP-1家族成員JunD分子在HIV-1潛伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1復制的T細胞系Jurkat,構建敲除JunD和穩(wěn)定（過）表達JunD的細胞系;拯救HIV-1假病毒并分別感染對照細胞、JunD敲除以及JunD穩(wěn)定表達的細胞系,通過熒光素酶技術檢測HIV-1前病毒DNA轉(zhuǎn)錄水平的變化。結果顯示,與對照組相比,JunD敲除顯著抑制了HIV-1的復制,而過表達JunD則促進了HIV-1的復制。該結果表明,JunD參與了HIV-1前病毒DNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,并可能由此影響HIV-1在宿主細胞內(nèi)的復制。本實驗為研究激活HIV-1細胞潛伏感染的靶點提供了實驗數(shù)據(jù)。 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2019,41(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞系、質(zhì)粒及主要試劑
    1.2 敲除J unD的J urka t細胞系的構建及敲除效果檢測
        1.2.1 sg RNA設計、合成與重組質(zhì)粒的構建
        1.2.2 嘌呤霉素最佳濃度的篩選
        1.2.3 表達sg RNA假病毒的制備
        1.2.4 sg RNA基因編輯活性鑒定
        1.2.5 敲除Jun D基因單克隆細胞的篩選與鑒定
    1.3 穩(wěn)定 （過） 表達J unD的J urka t細胞系的構建與鑒定
        1.3.1 穩(wěn)定 （過） 表達Jun D的重組質(zhì)粒的構建與鑒定
        1.3.2 穩(wěn)定 （過） 表達Jun D假病毒的制備
        1.3.3 假病毒感染與單克隆細胞篩選鑒定
    1.4 敲除或穩(wěn)定表達J unD的細胞系對HIV前病毒DNA轉(zhuǎn)錄激活作用的檢測
2 結果
    2.1 敲除J unD J urka t細胞系的構建及敲除效果檢測
        2.1.1 嘌呤霉素最優(yōu)工作濃度的確定
        2.1.2 sg RNA基因編輯活性檢測結果
        2.1.3 Jun D基因敲除細胞系的檢測
    2.2 穩(wěn)定 （過） 表達J unD細胞系的構建及鑒定
        2.2.1 穩(wěn)定表達Jun D質(zhì)粒的構建與鑒定
        2.2.2 穩(wěn)定 （過） 表達Jun D細胞系的檢測
    2.3 敲除或穩(wěn)定表達J unD對HIV-1前病毒DNA轉(zhuǎn)錄的影響
3 討論



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