本文關(guān)鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗免疫小鼠誘導(dǎo)的保護(hù)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲是一種屬于頂復(fù)門的細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,呈現(xiàn)世界性分布,能導(dǎo)致人獸共患寄生蟲病的發(fā)生。大多數(shù)人感染弓形蟲時通常沒有癥狀,但在免疫抑制和免疫缺陷個體中,如艾滋病病人、器官移植、長期接受化療的惡性腫瘤患者可能會導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。孕婦感染可引起流產(chǎn)、畸胎、死胎和胎兒失明等。動物感染弓形蟲給畜牧業(yè)也帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于目前尚無治療弓形蟲病的特效療法,所以開發(fā)有效的弓形蟲疫苗顯得尤為重要。本研究中我們選取了ROP5和ROP7兩種候選基因以構(gòu)建復(fù)合DNA疫苗。目的：研究目的是探索ROP5/ROP7基因?qū)ALB/c小鼠弓形蟲感染的免疫保護(hù)性。方法：根據(jù)GenBank發(fā)表的弓形蟲ROP5和ROP7序列設(shè)計合成引物,通過PCR擴(kuò)增獲取ROP5和ROP7基因。采用亞克隆技術(shù)將兩基因分別克隆至真核表達(dá)載體pBudCE4.1,分別構(gòu)建能表達(dá)ROP5和ROP7的重組真核表達(dá)載體pBudCE4.1-ROP5 (pROP5), pBudCE4.1-pROP7 (pROP7)和pBudCE4.1-ROP5/ ROP7 (pROP5/ROP7),并對它們進(jìn)行酶切鑒定。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293-T細(xì)胞,經(jīng)Western blot分析鑒定后,大量提取重組質(zhì)粒用于免疫小鼠。動物實驗通過ELISA檢測免疫小鼠血清特異IgG水平和細(xì)胞因子并觀察弓形蟲感染小鼠后的存活時間評價其免疫保護(hù)力。結(jié)果：PCR擴(kuò)增出1,650 bp和1,728 bp大小的目的基因片段,ROP5和ROP7兩個基因成功連接到同一個表達(dá)載體pBudCE4.1上并且能在HEK293T細(xì)胞中表達(dá)。Western blot分析,可檢測到ROP5和ROP7蛋白的表達(dá)。復(fù)合基因免疫的小鼠產(chǎn)生了較高水平的血清抗體。在動物試驗中,復(fù)合基因疫苗免疫的小鼠生存時間較其它組小鼠顯著延長,復(fù)合基因疫苗免疫小鼠中抗弓形蟲IgG、IgG2a的抗體水平均高于其它組(P0.05)。在細(xì)胞因子檢測中,雙基因疫苗免疫的小鼠表現(xiàn)出更高水平的IFN-γ(P0.05),而各組間IL-4和IL-10水平無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論：我們的研究結(jié)果表明,構(gòu)建的基因疫苗對弓形蟲的感染有一定的免疫保護(hù)作用且復(fù)合基因疫苗優(yōu)于單基因疫苗。本研究為弓形蟲基因疫苗的研制提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：剛地弓形蟲 ROP5 ROP7 核酸疫苗 免疫
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-12
• 前言12-14
• 第一部分 弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗的構(gòu)建及鑒定14-47
• 一、材料14-19
• 二、方法19-39
• 三、結(jié)果39-46
• 四、討論46-47
• 第二部分 弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗對小鼠的免疫效應(yīng)研究47-58
• 一、材料47-48
• 二、方法48-52
• 三、結(jié)果52-56
• 四、討論56-58
• 附圖58-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論著67-68
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 於劍;黃家政;艾必燕;樵星芳;陳建康;;核酸疫苗研究進(jìn)展[J];重慶中草藥研究;2009年02期

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗免疫小鼠誘導(dǎo)的保護(hù)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303641