本文關鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗免疫小鼠誘導的保護性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲是一種屬于頂復門的細胞內寄生原蟲,呈現世界性分布,能導致人獸共患寄生蟲病的發(fā)生。大多數人感染弓形蟲時通常沒有癥狀,但在免疫抑制和免疫缺陷個體中,如艾滋病病人、器官移植、長期接受化療的惡性腫瘤患者可能會導致嚴重的后果。孕婦感染可引起流產、畸胎、死胎和胎兒失明等。動物感染弓形蟲給畜牧業(yè)也帶來了巨大的經濟損失。由于目前尚無治療弓形蟲病的特效療法,所以開發(fā)有效的弓形蟲疫苗顯得尤為重要。本研究中我們選取了ROP5和ROP7兩種候選基因以構建復合DNA疫苗。目的：研究目的是探索ROP5/ROP7基因對BALB/c小鼠弓形蟲感染的免疫保護性。方法：根據GenBank發(fā)表的弓形蟲ROP5和ROP7序列設計合成引物,通過PCR擴增獲取ROP5和ROP7基因。采用亞克隆技術將兩基因分別克隆至真核表達載體pBudCE4.1,分別構建能表達ROP5和ROP7的重組真核表達載體pBudCE4.1-ROP5 (pROP5), pBudCE4.1-pROP7 (pROP7)和pBudCE4.1-ROP5/ ROP7 (pROP5/ROP7),并對它們進行酶切鑒定。將重組質粒轉染HEK293-T細胞,經Western blot分析鑒定后,大量提取重組質粒用于免疫小鼠。動物實驗通過ELISA檢測免疫小鼠血清特異IgG水平和細胞因子并觀察弓形蟲感染小鼠后的存活時間評價其免疫保護力。結果：PCR擴增出1,650 bp和1,728 bp大小的目的基因片段,ROP5和ROP7兩個基因成功連接到同一個表達載體pBudCE4.1上并且能在HEK293T細胞中表達。Western blot分析,可檢測到ROP5和ROP7蛋白的表達。復合基因免疫的小鼠產生了較高水平的血清抗體。在動物試驗中,復合基因疫苗免疫的小鼠生存時間較其它組小鼠顯著延長,復合基因疫苗免疫小鼠中抗弓形蟲IgG、IgG2a的抗體水平均高于其它組(P0.05)。在細胞因子檢測中,雙基因疫苗免疫的小鼠表現出更高水平的IFN-γ(P0.05),而各組間IL-4和IL-10水平無顯著性差異(P0.05)。結論：我們的研究結果表明,構建的基因疫苗對弓形蟲的感染有一定的免疫保護作用且復合基因疫苗優(yōu)于單基因疫苗。本研究為弓形蟲基因疫苗的研制提供了參考。
【關鍵詞】：剛地弓形蟲 ROP5 ROP7 核酸疫苗 免疫
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-12
• 前言12-14
• 第一部分 弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗的構建及鑒定14-47
• 一、材料14-19
• 二、方法19-39
• 三、結果39-46
• 四、討論46-47
• 第二部分 弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗對小鼠的免疫效應研究47-58
• 一、材料47-48
• 二、方法48-52
• 三、結果52-56
• 四、討論56-58
• 附圖58-60
• 參考文獻60-66
• 致謝66-67
• 攻讀學位期間發(fā)表的論著67-68
• 學位論文評閱及答辯情況表68

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 於劍;黃家政;艾必燕;樵星芳;陳建康;;核酸疫苗研究進展[J];重慶中草藥研究;2009年02期

  本文關鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白ROP5和ROP7的DNA疫苗免疫小鼠誘導的保護性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303641