一、研究目的 本研究采用人外周血分離單核細(xì)胞,體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞（dendritic cell,DC）,Her-2/neu基因重組腺相關(guān)病毒（rAAV-Her-2/neu）轉(zhuǎn)染DC,并檢測DC表型及Her-2的表達(dá)、與DC混合培養(yǎng)前后的T淋巴細(xì)胞亞群、DC刺激同種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的能力及DC誘導(dǎo)的特異性CTL對乳腺癌細(xì)胞株的殺傷作用。為臨床應(yīng)用rAAV-Her-2/neu轉(zhuǎn)導(dǎo)DC的主動免疫治療乳腺癌提供實驗依據(jù)。 二、材料和方法 （一） 材料 RPMI1640培養(yǎng)液、PBS緩沖液（PH7.4）、人AB血清、淋巴細(xì)胞分層液（Ficoll 1.077g/ml）、重組人GM-CSF、IL-4、TNF-α、Her-2/neu基因（跨膜區(qū)）重組腺相關(guān)病毒（rAAV-Her-2/neu）、絲裂霉素（MMC）、鼠抗人單抗FITC-CD1a、FITC-CD83、PE-CD40、PE-CD80、FITC-CD86、FITC-HLA-DR、PE-CD8、FITC-CD4、PE-CD3、PE-IgG1、FITC-IgG1、APC-Her-2、國產(chǎn)尼龍毛、放射性同位素³

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

培養(yǎng)過程中DC形態(tài)的變化

DC刺激同種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的能力檢測圖2一1尼龍毛柱圖2一2制備反應(yīng)細(xì)胞Fig.2一1NylonwoolcolurnnFig·2一2PerParingeractnigeells(四)刺激細(xì)胞的制備將MMC用雙蒸水配成300林g/ml溶液，取兩組成熟Dc細(xì)胞懸液各4.5ml，各加入MMC溶液0.sml，使其終濃度為30Pg/ml。將加入MMc的兩組細(xì)胞懸液，置37℃水浴3Omni，離心棄上清，沉淀細(xì)胞用，RlMll640洗一次，LXY一11型離心機，1500prm離心5面n。調(diào)整刺激細(xì)胞濃度與反應(yīng)細(xì)胞(T細(xì)胞)的比例為l:5(4ox一。

漸聚集于DC細(xì)胞周圍。培養(yǎng)2h4可觀察到T淋巴細(xì)胞增殖明顯，呈集落形式分布將DC包繞;培養(yǎng)7h8可觀察到T淋巴細(xì)胞大量增殖，集落明顯增多、變大，見圖2一4。24h78h圖2一4混和淋巴細(xì)胞反應(yīng)觀察Fig.2一4MixedlymPhodyeeraction不加DC的T淋巴細(xì)胞dpm值為923.6士94.6。加病毒組Dc和無病毒組Dc混合培養(yǎng)后的T淋巴細(xì)胞Pdm值明顯高于不加DC的T淋巴細(xì)胞(尸<.005)。隨著D/cT的增加，即m值逐步增加。在相同DcT/兩組之間無顯著性差異(尸>0.05)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3016811