目的 SOHLH1 （Spermatogenesis-and oogenesis-specific bHLH transcription factor-1）和SOX30（SRY box）是與精子發(fā)生相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,Sohlh1與Sox30的基因敲除雄鼠均喪失生育能力。出生后7天Sohlh1基因敲除雄鼠DNA芯片顯示Sox30表達(dá)顯著下調(diào),本文探究了早期發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SOHLH1對(duì)精子發(fā)生后期的關(guān)鍵基因Sox30基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。方法構(gòu)建Sox30啟動(dòng)子熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒,瞬時(shí)共同轉(zhuǎn)染Sox30熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒和Sohlh1真核表達(dá)質(zhì)粒并利用熒光素酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)熒光值。通過染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SOHLH1與Sox30啟動(dòng)子DNA序列特異序列的結(jié)合情況篩選主要激活位點(diǎn)。結(jié)果共轉(zhuǎn)染Sohlh1真核表達(dá)質(zhì)粒和Sox30啟動(dòng)子區(qū)域熒光素酶質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)組熒光素酶活性高于對(duì)照組。SOHLH1與Sox30啟動(dòng)子上的特異性位點(diǎn)結(jié)合,在-489 bp位點(diǎn)的結(jié)合作用最強(qiáng)。結(jié)論精子發(fā)生早期重要轉(zhuǎn)錄因子SOHLH1可以直接激活頂體形成相關(guān)基因Sox30轉(zhuǎn)錄,-489 bp （CAGGTG）為主要特異性結(jié)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2019,29(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 基因組DNA提取
        1.3.2 Sox30基因啟動(dòng)子區(qū)域SOHLH1結(jié)合位點(diǎn)分析及引物設(shè)計(jì)
        1.3.3 PCR擴(kuò)增Sox30基因啟動(dòng)子片段
        1.3.4 構(gòu)建Sox30啟動(dòng)子全長(zhǎng)和截短序列的pGL3-Sox30熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒
        1.3.5 轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并檢測(cè)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)熒光素酶活性
        1.3.6 染色質(zhì)免疫共沉淀 （ChIP） 實(shí)驗(yàn)篩選SOHLH1結(jié)合位點(diǎn)
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 構(gòu)建pGL3-Sox30啟動(dòng)子區(qū)域熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒
    2.2 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子SOHLH1對(duì)Sox30基因啟動(dòng)子區(qū)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用
    2.3 ChIP實(shí)驗(yàn)篩選轉(zhuǎn)錄因子SOHLH1與Sox30基因啟動(dòng)子區(qū)的主要結(jié)合位點(diǎn)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Stra8:生殖細(xì)胞有絲分裂轉(zhuǎn)變?yōu)闇p數(shù)分裂前特異表達(dá)的基因[J]. 米美玲,楊蓓,徐斯凡,鄒挺.  中華男科學(xué)雜志. 2009(01)



本文編號(hào)：3015807