本文關(guān)鍵詞：利用ADAMTS-18基因敲除小鼠研究ADAMTS-18在骨骼發(fā)育中的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：含I型血小板結(jié)合蛋白模體的解整合素樣金屬蛋白酶ADAMTSs (a disintegrin andmetalloproteinase with thrombospondin motifs)是一類游離在血漿中的或者整合在細(xì)胞外基質(zhì)的金屬蛋白酶亞家族,共有19個(gè)成員,廣泛表達(dá)于人體的多種組織和器官,參與多種病理與生理過程。ADAMTS-18是一種“孤兒ADAMTSs (orphan ADAMTSs) ",即不知功能或底物的ADAMTS家族成員。有報(bào)道顯示ADAMTS-18與腫瘤發(fā)生、眼睛發(fā)育,及凝血酶切割相關(guān)。最近,生物信息學(xué)研究提示ADAMTS-18為一種新的骨密度發(fā)育相關(guān)基因,與人類的股骨骨折密切相關(guān)。我們前期研究發(fā)現(xiàn),ADAMTS-18參與了血栓溶解過程。為了進(jìn)一步闡明ADAMTS-18在體內(nèi)的生物學(xué)作用,課題組在國(guó)際上率先建立了ADAMTS-18基因敲除(ADAMTS-18-/-)小鼠。在繁育ADAMTS-18基因敲除小鼠的過程中我們發(fā)現(xiàn)ADAMTS-18基因完全敲除小鼠有顯著的體格減小,提示ADAMTS-18基因缺失后會(huì)影響骨骼重塑。本研究首次利用ADAMTS-18基因敲除小鼠來探討ADAMTS-18對(duì)小鼠骨骼發(fā)育的影響及可能的分子機(jī)制。目的：本研究中,我們將利用ADAMTS-18基因敲除小鼠,研究ADAMTS-18與骨骼發(fā)育及骨質(zhì)疏松的關(guān)系；同時(shí)結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)分析,探討ADAMTS-18影響骨骼重塑的可能的分子機(jī)制,從而為臨床骨質(zhì)疏松等骨相關(guān)疾病的治療提供新的靶點(diǎn)。方法：1、將ADAMTS-18+/-基因型雜合子的小鼠(以下簡(jiǎn)稱HT)雄雌交配繁殖,利用PCR鑒定基因型,得到足夠數(shù)量的同一出生時(shí)期的ADAMTS-18+/+野生型小鼠(以下簡(jiǎn)稱WT),ADAMTS-18-/-基因敲除小鼠(以下簡(jiǎn)稱KO),全部為雄鼠。2、監(jiān)測(cè)ADAMTS-18基因敲除小鼠與野生鼠從胚胎時(shí)期一直到15 W的體重及身長(zhǎng),15 W后將小鼠麻醉處死取椎骨、股骨、脛骨、橈骨、肱骨,分別測(cè)出長(zhǎng)度、重量以及生物力學(xué)檢測(cè)；3、通過生物信息學(xué)、HE(蘇木素伊紅)染色、Micro CT (微計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù))及電鏡等方法,探討ADAMTS-18調(diào)控骨骼發(fā)育的機(jī)制。結(jié)果：1、KO小鼠與WT小鼠體重身長(zhǎng)有顯著差異,基因敲除小鼠身長(zhǎng)偏短,體重偏輕。2、KO小鼠與WT小鼠全身骨密度有顯著性差異,KO小鼠骨密度減少。3、KO小鼠與WT小鼠的股骨、脛骨、肱骨、橈骨長(zhǎng)度重量以及生物力學(xué)均有差異,其中股骨各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著性差異。4、KO小鼠與WT小鼠的股骨Micro CT、電鏡以及HE染色提示ADAMTS-18缺失引起骨質(zhì)疏松及骨彈力纖維的發(fā)育異常。結(jié)論：1、ADAMTS-18基因敲除小鼠與野生鼠比較有明顯的骨骼發(fā)育異常；2、ADAMTS-18調(diào)控了骨骼重塑及骨彈力纖維發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：ADAMTS-18 基因敲除 骨骼 骨質(zhì)疏松 蛋白組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞10-15
• 第一章 前言15-20
• 1.1 ADAMTS-18的研究現(xiàn)狀15-16
• 1.2 骨質(zhì)疏松16-18
• 1.2.1 骨質(zhì)疏松的現(xiàn)狀16-17
• 1.2.2 骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)理17
• 1.2.3 骨質(zhì)疏松的臨床表現(xiàn)及診斷指標(biāo)17-18
• 1.2.4 骨質(zhì)疏松的預(yù)防與治療18
• 1.3 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容及意義18-20
• 1.3.1 研究?jī)?nèi)容18-19
• 1.3.2 研究意義19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料20-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑20-21
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)耗材21-22
• 2.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.5 PCR基因型鑒定的擴(kuò)增引物23-24
• 2.6 常用試劑配方24-25
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法25-33
• 3.1 ADAMTS-18基因敲除鼠及野生鼠的繁育及篩選鑒定25-28
• 3.1.1 繁育小鼠25
• 3.1.2 小鼠基因型鑒定及篩選25-27
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)小鼠的選取27-28
• 3.2 小鼠體重身長(zhǎng)的監(jiān)測(cè)28
• 3.3 小鼠活體骨密度(BMD)的測(cè)定28
• 3.4 小鼠四肢骨骼及椎骨的重量長(zhǎng)度及生物力學(xué)測(cè)定28-29
• 3.5 骨髓細(xì)胞全蛋白的檢測(cè)---考馬斯亮藍(lán)染色29-30
• 3.6 股骨HE染色30-31
• 3.7 小鼠脛骨、股骨Micro CT掃描31-32
• 3.8 小鼠股骨電鏡掃描32
• 3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-49
• 4.1 小鼠的繁育及PCR基因型鑒定33-34
• 4.2 小鼠身長(zhǎng)體重的監(jiān)測(cè)34-36
• 4.3 小鼠活體骨密度(BMD)的測(cè)定及比較36-39
• 4.4 各部位骨骼的長(zhǎng)度及重量的測(cè)定結(jié)果39-41
• 4.5 各部分骨骼生物力學(xué)測(cè)定41-43
• 4.6 股骨的HE染色結(jié)果43-44
• 4.7 Micro CT掃描結(jié)果44-46
• 4.8 股骨電鏡掃描結(jié)果46
• 4.9 課題組前期生物信息學(xué)分析46-48
• 4.10 骨髓細(xì)胞全蛋白的考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果48-49
• 第五章 討論49-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 附錄61-64
• 致謝64-65

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  本文關(guān)鍵詞：利用ADAMTS-18基因敲除小鼠研究ADAMTS-18在骨骼發(fā)育中的作用及機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：301198