發(fā)布時間：2017-04-11 20:09

  本文關鍵詞：動、靜脈移植骨髓間充質干細胞治療急性期腦梗死模型的比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討大鼠缺血再灌注(ischemia-reperfusion)6小時分別經動、靜脈途徑移植骨髓間充質干細胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)后,對血清腫瘤壞死因子(TNF-α)水平;缺血半暗帶處星形膠質細胞(GFAP)、血管內皮生長因子(VEGF)、B淋巴細胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)、bcl-2相關x蛋白(Bax)、凋亡細胞數(shù)、神經功能缺損評分(mNSS)和體重計數(shù)的影響以及干細胞在器官分布有無差異,初步探討B(tài)MSCs治療急性腦梗死的具體機制和比較動、靜脈移植途徑差異。方法:1、采用改良線栓法栓塞阻隔大鼠大腦中動脈供血供氧,制作MCAO模型。2、采用全骨髓貼壁分離法提取、提純和擴增培養(yǎng)骨髓間充質干細胞,流式細胞儀檢測鑒定細胞表面抗原,氯甲基苯甲酰胺(CM-dil)染色標記BMSCs以示蹤。3、MCAO6小時后分別經頸動脈、尾靜脈途徑移植等劑量的BMSCs和被標記的BMSCs。4、移植后第7天觀察記錄神經功能缺損評分和體重計數(shù)。5、酶聯(lián)免疫吸附劑測定血清TNF-α水平。6、免疫組化測定GFAP、VEGF、Bcl-2和Bax表達。7、原位末端標記法測定缺血半暗帶處凋亡細胞數(shù)。8、熒光觀察BMSCs在腦組織、肺臟、脾臟、肝臟、腎臟和心臟的分布差異。結果:1、流式細胞儀檢測細胞表面抗原結果示:CD90表達率為95.7%、CD29表達率為97.3%、CD106表達率為52.7%、CD11b表達率為6.01%、CD34表達率為2.95%、CD45表達率為2.26%。2、頸動脈BMSCs組mNSS評分顯著小于頸動脈PBS組,尾靜脈BMSCs組mNSS評分顯著小于尾靜脈PBS組,頸動脈BMSCs和尾靜脈BMSCs組相比較mnss評分無差異;頸動脈bmscs體重計數(shù)顯著大于頸動脈pbs組,尾靜脈bmscs組體重計數(shù)顯著大于尾靜脈pbs組,頸動脈bmscs和尾靜脈pbs組體重計數(shù)比較無差異。3、gfap陽性細胞主要集中在梗死中心周邊缺血半暗帶處,移植組陽性細胞數(shù)顯著大于pbs組,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組相比較無差異。vegf陽性細胞數(shù)在缺血半暗帶處強表達,尾靜脈bmscs組陽性表達強于尾靜脈pbs組,頸動脈bmscs和頸動脈pbs組陽性表達無差異,但頸動脈bmscs組有增高趨勢,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組陽性表達無差異。4、vegf在尾靜脈bmscs組顯著大于尾靜脈pbs組,頸動脈bmscs組和頸動脈pbs組無統(tǒng)計學差異,但頸動脈bmscs組有增高趨勢,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組無統(tǒng)計學差異。5、bcl-2陽性細胞普遍見于梗死側和健側大腦半球,腦梗死缺血半暗帶處陽性表達最為強烈。暫且不論移植途徑差異,bmscs組陽性細胞累積光密度值顯著多于pbs組。頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組陽性細胞累積光密度值無差異。bax陽性細胞主要集中表達于缺血半暗帶處,頸動脈bmscs組、尾靜脈bmscs組、頸動脈pbs組和尾靜脈pbs組陽性細胞累積光密度值比較無差異。6、頸動脈bmscs組血清tnf-α濃度值顯著低于頸動脈pbs組,尾靜脈bmscs組顯著低于尾靜脈pbs組,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組血清tnf-濃度值無統(tǒng)計學差異,頸動脈pbs組較尾靜脈pbs組血清tnf-α濃度值有增高趨勢,但無統(tǒng)計學差異。7、凋亡細胞主要出現(xiàn)在缺血半暗帶處,健側未見陽性細胞。bmscs組凋亡細胞數(shù)顯著小于pbs組,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組陽性細胞數(shù)無差異。8、示蹤標記的bmscs主要集中于肺臟和脾臟,梗死周圍組織可見干細胞分布,健側未見;肝臟和腎臟干細胞分布較少,心臟未見干細胞熒光信號,頸動脈bmscs組和尾靜脈bmscs組中同一器官干細胞分布數(shù)量無統(tǒng)計學差異。結論:bmscs可通過增強gfap、vegf的表達,維持神經血管單元的完整性,增加bcl-2的表達、減少凋亡細胞數(shù),降低炎癥因子tnf-α水平,以促進缺血再灌注后神經功能的恢復。在缺血再灌注6小時經頸動脈和尾靜脈途徑移植bmscs后干細胞在各器官分布和療效無差異。但尾靜脈途徑創(chuàng)傷微小,可接受細胞量多,為腦梗死早期最佳移植途徑。
【關鍵詞】：缺血再灌注 腦梗死 骨髓間充質干細胞 移植 凋亡 動物模型
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3;R-332
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英縮略詞表11-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 材料與方法14-24
• 2.1 實驗動物及分組14
• 2.2 試劑14-15
• 2.3 儀器15-16
• 2.4 手術材料和器械16
• 2.5 BMSCs分離、培養(yǎng)、擴增、鑒定和染色16-17
• 2.6 MACO模型制作17-18
• 2.7 神經功能缺損評分18-19
• 2.8 移植19
• 2.9 體重測量及材料獲取19-20
• 2.10 免疫組化20
• 2.11 TUN EL檢測20-21
• 2.12 ELISA檢測21-22
• 2.13 圖片采集和分析22-23
• 2.14 數(shù)據處理統(tǒng)計分析23-24
• 第3章 結果24-35
• 3.1 BMSCs鑒定和熒光標記24-25
• 3.2 MCAO模型體重及mNSS變化25-26
• 3.3 免疫組化結果26-32
• 3.4 血清ELISA檢測結果32
• 3.5 BMSCs全身主要器官分布及其數(shù)量差異32-35
• 第4章 討論35-38
• 第5章 結論與展望38-39
• 5.1 結論38
• 5.2 展望38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻40-43
• 附錄43-44
• 攻讀學位期間的研究成果44-45
• 綜述45-53
• 參考文獻50-53

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  本文關鍵詞：動、靜脈移植骨髓間充質干細胞治療急性期腦梗死模型的比較，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：299864