目的:探討間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）共培養(yǎng)對(duì)體外誘導(dǎo)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的造血干/祖細(xì)胞生成巨核細(xì)胞的影響。方法:分離得到骨髓和臍帶2種來(lái)源的MSC,并對(duì)它們進(jìn)行表面標(biāo)志和多向分化能力的鑒定,同時(shí)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR及對(duì)RT-PCR產(chǎn)物的電泳分析,對(duì)比相同培養(yǎng)代數(shù)下2種MSC表達(dá)造血因子的情況;用梯度離心法分離得到單個(gè)核細(xì)胞,通過(guò)直接接觸或Trans-well分隔的方式分別與MSC共培養(yǎng),觀察細(xì)胞增殖情況,并檢測(cè)巨核系特異性的表面標(biāo)志和相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:骨髓和臍帶來(lái)源的MSC均分泌對(duì)巨核細(xì)胞增殖分化有促進(jìn)作用的造血因子,與造血干/祖細(xì)胞直接共培養(yǎng),對(duì)于巨核細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用,分化效果不明顯;在非接觸共培養(yǎng)的條件下,對(duì)巨核細(xì)胞的增殖及分化都產(chǎn)生促進(jìn)作用,且骨髓來(lái)源的MSC較臍帶來(lái)源的MSC效果更加明顯。結(jié)論:MSC與臍帶血造血干/祖細(xì)胞非接觸培養(yǎng),對(duì)其向巨核分化和增殖的促進(jìn)作用明顯,本實(shí)驗(yàn)所用的骨髓來(lái)源MSC促分化效果更好。本研究為今后進(jìn)一步優(yōu)化巨核系誘導(dǎo)分化體系奠定了基礎(chǔ),并對(duì)未來(lái)體外大規(guī)模制備巨核系祖細(xì)胞應(yīng)用于臨床治療有一定的指導(dǎo)作用。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通訊. 2014,25(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

間充質(zhì)干細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞直接共培養(yǎng)對(duì)造血干細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化的影響

43.7%±1.73%，明顯高于臍帶非接觸培養(yǎng)為36%±1.66%，空白對(duì)照組低于上述兩組為27.3%±1.3%�？梢�(jiàn)骨髓和臍帶來(lái)源的MSC的旁分泌作用有促進(jìn)巨核分化的能力，但同造血干細(xì)胞直接接觸的情況下，這種作用的效果就極不明顯（圖5B）。細(xì)胞增殖分析顯示，懸浮細(xì)胞數(shù)在4個(gè)共培養(yǎng)組中都明顯增加，增長(zhǎng)倍數(shù)為1.5~2，接觸和非接觸培養(yǎng)對(duì)總有核細(xì)胞數(shù)的影響沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在2種不同培養(yǎng)方式中，骨髓來(lái)源的MSC均優(yōu)于臍帶來(lái)源的MSC，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明各組造血前體細(xì)胞標(biāo)志CD34的表達(dá)沒(méi)有明顯差異（圖5C）。這說(shuō)明，臍帶和骨髓來(lái)源的MSC均能夠在體外支持造血干/祖細(xì)胞的擴(kuò)增并輔助巨核誘導(dǎo)體系促進(jìn)巨核系細(xì)胞分化，其中本研究使用的臍帶來(lái)源的MSC對(duì)于造血干/祖細(xì)胞及巨核祖細(xì)胞的支持能力弱于骨髓來(lái)源的，并且這種支持作用的差異不論與造血細(xì)胞接觸與否都能體現(xiàn)，可能是由骨髓細(xì)胞分泌更適合巨核分化的生長(zhǎng)因子所致。3討論目前臨床上血小板供應(yīng)緊張，如何在體外獲得大量成熟的巨核細(xì)胞成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。然而巨核分化是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，須經(jīng)歷造血干細(xì)胞向巨核系的分化、巨核祖細(xì)胞的擴(kuò)增，再進(jìn)行核內(nèi)染色體的復(fù)制，形成多核的能產(chǎn)生血小板的血小板前體細(xì)胞[19]。這個(gè)過(guò)程受造血微環(huán)境及各種正負(fù)調(diào)控因子的影響。MSC雖然在造血微環(huán)境中數(shù)量不多，但對(duì)圖55種培養(yǎng)體系對(duì)造血干/祖細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化以及分化過(guò)程中對(duì)細(xì)胞增殖的影響A：誘導(dǎo)培養(yǎng)模型；B：流式細(xì)胞術(shù)分析不同共培養(yǎng)方式對(duì)造血干/祖細(xì)胞向巨核分化的影響（*P<0.05，**P<0.01）；C：不同共培養(yǎng)方式對(duì)造血干/祖細(xì)胞向巨核分化過(guò)程中細(xì)胞增殖的影響（*P<0.05，**P<0.01）曲洺逸等：間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)造血干/祖細(xì)胞分化為巨核細(xì)胞的影響307


本文編號(hào)：2983005