熱休克蛋白（Heat shock protein，HSP）的佐劑樣效應(yīng)以及在抗腫瘤及抗感染免疫中的應(yīng)用，一直是HSP研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，HSP70作為熱休克蛋白家族的重要成員，有大量的報(bào)道和研究證實(shí)，從腫瘤組織中分離的HSP70在動物體內(nèi)能誘導(dǎo)出明顯的腫瘤特異性CTL，對隨后接種腫瘤細(xì)胞具有抵抗作用。采用HSP70-抗原肽復(fù)合物作為疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤抗感染免疫已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段并顯示了良好的應(yīng)用前景。但作為個(gè)性化的治療模式，該方案難以產(chǎn)業(yè)化，因此體外表達(dá)HSP70分子，然后與抗原肽交聯(lián)，可能成為一種新型疫苗和新的治療模式，在本研究中，我們采用原核表達(dá)系統(tǒng)，對人HSP70D分子進(jìn)行大規(guī)模的表達(dá)純化，旨在建立一種新的HSP70純化的方式，研究所純化的人HSP70D的佐劑樣效應(yīng)，并將其應(yīng)用于腫瘤的免疫治療。 首先，根據(jù)人HSP70D cDNA序列設(shè)計(jì)一對包含HSP70D全長編碼區(qū)的PCR引物。其中上游引物為5’TA CAT ATG GCC AAA GCC GCG GCA GTC G（包含起始碼ATG，5’端包含Nde Ⅰ酶切位點(diǎn)），下游引物為5’TG CTC GAG ATC TAC CTC ... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HSP7oDPCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳分析

轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，克隆流程圖見圖己1從湯口I酶切鑒定(圖9)。電泳結(jié)果顯示，陽性插插入片段條帶以及一條約5300bp的載體條帶，而bP的載體條帶，或得到未切開的質(zhì)粒條帶。1234567

7pET24a一HSp7oD重組子的T7引物測序結(jié)果(部分)ig.7SequeneingdiagramofPET24a一HSP70DreeombinantwithT7Primer.


本文編號：2976148