目的克隆表達(dá)錫蘭鉤蟲血小板抑制劑（hookworm platelet inhibitor, HPI）基因,并研究其編碼蛋白的生物學(xué)特性。方法以錫蘭鉤蟲cDNA為模板,參考已公布的犬鉤蟲血小板抑制劑（AcaHPI）基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,運(yùn)用RT-PCR擴(kuò)增其AceHPI基因序列,并將其連接至pET-28a表達(dá)載體,誘導(dǎo)其表達(dá)并純化。利用在線軟件對(duì)其編碼蛋白的氨基酸序列進(jìn)行同源性比對(duì)和生物信息學(xué)分析。結(jié)果錫蘭鉤蟲AceHPI基因的ORF序列全長(zhǎng)603 bp,編碼200個(gè)氨基酸,與犬鉤蟲AcaHPI氨基酸序列同源性為91%。構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-AceHPI經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)與純化,獲得了分子質(zhì)量約為26 kDa的可溶性融合蛋白。預(yù)測(cè)分析表明該蛋白為疏水蛋白,前17個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列且無跨膜結(jié)構(gòu)域。結(jié)論成功克隆表達(dá)了AceHPI基因并對(duì)其編碼氨基酸進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,為進(jìn)一步研究AceHPI在感染宿主體內(nèi)的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2019,35(08)北大核心

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【部分圖文】：

圖３ＡｃｅＨＰＩ氨基酸序列的同源性比對(duì)


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