在脊椎動物的發(fā)育調(diào)控當(dāng)中，鋅指蛋白基因起著廣泛的作用。確定對心血管系統(tǒng)中起作用的調(diào)控基因?qū)τ谖覀兞私庀忍煨孕呐K病和其它心血管疾病的發(fā)病機理非常必要。而鋅指蛋白中的Cys2／His2型鋅指蛋白基因是一類很大的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子家族基因，已發(fā)現(xiàn)很多Cys2／His2型鋅指蛋白參與了心臟的發(fā)育和心血管疾病。為了了解對心臟發(fā)育和疾病有關(guān)的新基因，我們通過擴增人類心臟文庫發(fā)現(xiàn)了一個SCAN（LER）框的鋅指蛋白新基因，通過國際基因命名委員會命名為ZNF394。ZNF394全長2180個堿基，含有一個長為1686個堿基的開放閱讀框，編碼為561個氨基酸的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分子量大約為64千道爾頓，位于染色體7q11． 21。該基因在N端含有一個高度保守的SCAN型結(jié)構(gòu)域，相鄰一個KRAB框型結(jié)構(gòu)域，并且在其c端具有非常保守空間的7個連續(xù)的C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)單元，通過對人類成體組織進(jìn)行Northern雜交，得到一個大約為2． 18KB的轉(zhuǎn)錄本，該轉(zhuǎn)錄本存在于心臟、肌肉組織和腦組織，表明鋅指蛋白基因ZNF394在人類成體組織中的心臟、腦和肌肉組織中有較特異的表達(dá)。通過人工合成多肽，免疫新西蘭大白兔，獲得多克隆抗... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

為SCAN(LER)結(jié)構(gòu)域家族的幾個成員的核昔酸序列比較

為通過比較發(fā)現(xiàn)在新基因多叨巧滲李中的1368bp中有一個Hz’n班H酶切位點。所以通過H，’n班H限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切不僅可以檢測出連接正反的方向，也可以進(jìn)一步判斷所擴增的PCR產(chǎn)物是否正確，如圖5一1例舉了表達(dá)載體pEGFP一Nl的酶切結(jié)果。123X4—300ObP—2000bp—1500bP—1200bn—1031bP—600bP—500bP圖5一1l為EGFP的空載體的瓊脂糖凝膠點樣結(jié)果，2，3為方叮刀故H酶切結(jié)果，M為DNAMarker，4為重組質(zhì)粒pEGFP一NI一ZNF394的酶切結(jié)果5.2.2湯Vl召9歲基因在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的定位分析

對人胚胎的28天和35天胚胎進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)刀叭籠丫所產(chǎn)生的抗體在人類胚胎的心臟組織有表達(dá)。該結(jié)果進(jìn)一步說明了多協(xié)召夕璧在心臟的發(fā)育調(diào)控當(dāng)中具有重要的作用。結(jié)果見圖5一4。圈5一4圖5一4為胚胎原位抗體染色，箭頭表示zNF394蛋白質(zhì)在心臟組織和上下肢肌肉組織中有表達(dá)。A圖為28天的人胚胎，原始胚胎體長為0.scm，B圖為35天的人胚胎，原始胚胎體長為1.OC.。通過比較，發(fā)現(xiàn)在28天的胚胎中的心臟、肢芽(用箭頭符號表示)和肝臟有表達(dá)(用三角符號表示)，而在35天的胚胎中的心臟、肢芽(用箭頭符號表示)和脊索中出現(xiàn)了表達(dá)(用三角符號表示)。5.3討論將外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞是目前研究基因編碼產(chǎn)物功能和基因表達(dá)調(diào)控的基本方法。熒光素酶、p一半乳糖昔酶和綠色熒光蛋白通常作為報告基因，通過分析報告基因的表達(dá)量可以定量分析外源基因的表達(dá)情況。質(zhì)粒是基因工程重要的載體之一。它是細(xì)胞內(nèi)的共生型遺傳因子

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鋅指結(jié)構(gòu):最普遍的核酸識別元件[J]. 趙志虎,馬清鈞.  生物技術(shù)通訊. 2001(01)



本文編號：2963456