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結(jié)核分枝桿菌PPE25、PPE27和PE19蛋白對巨噬細(xì)胞RAW264.7的影響及表達(dá)ppe25基因的重組恥垢分枝桿菌的

發(fā)布時間:2020-12-30 06:35
  結(jié)核。═uberculosis, TB)是由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)感染引起的慢性呼吸道傳染病,世界上三分之一的人口已被感染,每年新發(fā)病例接近九百萬例,它在世界范圍內(nèi)傳播、發(fā)病是其盛行的原因之一。pe/ppe基因占據(jù)結(jié)核分枝桿菌基因組編碼區(qū)的10%,PE/PPE蛋白家族中一些成員被鑒定為是毒力因子,參與宿主免疫反應(yīng),但大部分PE/PPE蛋白的確切功能還需要探索,其中包括PPE25、PPE27和PE19蛋白。本研究利用原核體系表達(dá)和純化獲得的PPE25、PPE27、PE19蛋白與小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7相互作用以初步解析其生物功能。此外,為以后更深入地研究該家族蛋白的功能和在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中的作用,成功構(gòu)建了帶有FLAG標(biāo)簽的重組穿梭表達(dá)載體pMV261-ppe25,并電轉(zhuǎn)化至無毒快速生長的恥垢分枝桿菌,從而獲得重組菌株。1.結(jié)核分枝桿菌PPE25、PPE27和PE19蛋白對巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞因子和死亡方式的影響純化獲得重組蛋白PPE25.PPE27和PE19,去除內(nèi)毒素后經(jīng)過鱟試劑測定內(nèi)毒素含量... 

【文章來源】:揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】:55 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

結(jié)核分枝桿菌PPE25、PPE27和PE19蛋白對巨噬細(xì)胞RAW264.7的影響及表達(dá)ppe25基因的重組恥垢分枝桿菌的


圖2TLR2信巧通路US'??巧g.?2?TL民2?signaling?pathway??TLR4的基因定位于9號染色體,主要存在于單核巨隨細(xì)胞

標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)曲線,系統(tǒng)檢測


Cytokine?/Chemokine?Standard?掠準(zhǔn)品粉末溶于?250?nL?SW?后濃度是?10000?pg/mL,按照梯??度稀釋后,依次稀釋成2000、400、80、16、3.2?pg/mL,系統(tǒng)檢測自動生成際準(zhǔn)曲線。如??圖1-5所示,各細(xì)胞因子的相關(guān)系數(shù)R2在0.97 ̄1.00之間,從而保證檢測樣品的準(zhǔn)確性。??IL-6??圧-IP??拉,428%,R?,0燃?*0.934??巧3-?/?巧4-??.-I?L??L?.??巧-,?如?如?巧S?巧1日1?1〇3?巧5??柳,'?pg/ml??圧-12p40?TNF-a??議*3欲,巧?0.繳?CV,17槪,陣"OS巧??10?-?巧-?甲一??巧至-?巧2-??!日。*?―—?■"'■—T???1?—"-1?,0?-?*f?I?'1??I?'?"°??10.,?1@'?巧3?10!?10

克隆載體,表達(dá)載體,酶切鑒定,瓊脂糖凝膠電泳


隆??25。PHh??100?齡??圖2-2ppe25基因PCR擴(kuò)增瓊脂糖凝膠電泳??Fig.?2-2?Analysis?of?PCR?by?agarose?gel?electrophoresis??M:?DL2000?DNA?marker;?1:?ppelS?PCR?product??2.3重組質(zhì)粒pMV261-/?pe25的篩選及鑒定??(1)


本文編號:2947181

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