目的探究蛋白激酶9 （PK9）在約氏瘧原蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育中的作用。方法基于瘧原蟲(chóng)PlasmoDB數(shù)據(jù)庫(kù),查找約氏瘧原蟲(chóng)致死株17XL （Py17XL）的PK9序列信息, BLAST比對(duì)Py PK9和惡性瘧原蟲(chóng)PK9（Pf PK9）以及人蛋白激酶p78的同源性。提取Py17XL株野生型（WT）基因組DNA,設(shè)計(jì)引物, PCR擴(kuò)增PK9基因。采用CRISPR-Cas9技術(shù),將同源臂與sgRNA序列一起連接到PYC-MCS質(zhì)粒中,構(gòu)建PK9基因敲除（PK9KO）重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至Py17XL蟲(chóng)株內(nèi),經(jīng)乙胺嘧啶篩選、克隆,進(jìn)行PCR鑒定和測(cè)序。10只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為WT感染組和PK9KO感染組,每組5只,重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。每鼠腹腔注射1×105個(gè)紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng),每隔24 h取血檢測(cè)小鼠原蟲(chóng)血癥,觀察小鼠存活情況。200只3～5日齡的斯氏按蚊隨機(jī)分為WT感染小鼠吸血組和PK9KO感染小鼠吸血組,每組100只。于吸血8 d后解剖蚊胃,每組隨機(jī)選取15只斯氏按蚊進(jìn)行解剖,測(cè)定蚊胃中卵囊的數(shù)量。10只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為WT子孢子感染組和PK9KO子孢子感染組,每組5只,重復(fù)2次實(shí)驗(yàn)。每... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2019年03期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

PK9缺失對(duì)Py17XL蚊期瘧原蟲(chóng)卵囊數(shù)量變化的影響6050WT感染小鼠WTinfectedmicePK9KO感染小鼠PK9KOinfectedmice卵Numbera：P>0.05


本文編號(hào)：2945774