丙型肝炎病毒(HCV)是有囊膜的單股正鏈RNA病毒,屬黃病毒科肝炎病毒屬�；蚪M全長約9.6kb,僅含有一個(gè)開放讀碼框(ORF),ORF兩側(cè)具有與復(fù)制和翻譯相關(guān)的非編碼區(qū)(UTR)。HCV是丙型肝炎的病原體,急性感染后約75%發(fā)展為慢性肝炎,其中約20%結(jié)局為肝硬化或肝功能衰竭,并有可能進(jìn)一步發(fā)展為肝細(xì)胞肝癌。目前全世界有1.7億HCV感染者,HCV感染已經(jīng)成為全球性的嚴(yán)重社會公共衛(wèi)生問題之一。 迄今尚無特異有效的防治HCV感染的方法,疫苗研究也未取得明顯進(jìn)展。其原因除了HCV本身型別多樣,且高度變異以外,缺乏穩(wěn)定可靠的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和小動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?也極大地制約著HCV及其致病機(jī)理和防治研究的深入開展。利用傳統(tǒng)方法建立HCV細(xì)胞培養(yǎng)模型一直未獲得突破性進(jìn)展,而體外轉(zhuǎn)錄制備感染性RNA(感染性轉(zhuǎn)錄體)技術(shù)的建 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

各目的基因片段的PCRF1910AmPlifieationofB3US、B3UL、BSUI、BSUll、(A)

載體自身各有l(wèi)個(gè)scal位點(diǎn)，而且在酶切鑒定pBSU一TEasy重組子時(shí)，已知BSU為反向插入T載體中，使用Seal單酶切，將得到1186bp與429lbp的片段，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳后可見與預(yù)期大小相符的條帶(圖12)。連接后的片段經(jīng)再次測序，讀框正確，無移碼突變。圖12重組質(zhì)粒pBSU一AHE一TEasy的酶切鑒定結(jié)果F1912RestrietionendonueleasesdigestionofreeombinantPlasmidPBSU一AHE一TEasyl:PBSU一AHE一TEasy/Xhol+Xbal;2:入DNA/EeoRI+HindlllMarker3:DL2000Marker:4:PBSU一AHE一TEasy/Seal52

致p3oll上417obp處Hindlll位點(diǎn)消失，pHFLurtl終長度16163bp，并且在使用Xbal+Seal雙酶切，BamHI與Hindlll分別單酶切時(shí)，與p30llutrl酶切結(jié)果截然不同(圖13)。圖13重組質(zhì)粒pHFLutrl與p30llutrl的酶切鑒定結(jié)果比較F1913RestrietionendonueleasesdigestionofPlasmidsPHFLutrlandP301lutrlI:P301lutrl/Xbal+Seal(3.4+13.7kb):2:P301]utrl/BamHI(5.2+5.7+6.2kb)3:P30llutrl/HindDI(1.2+1.8+2.1+4+skb);4:DL2000marker(rfomuPtobottom:2000，1000，750，500，250，10ObP)5:入DNA/Hind111Marker(rfomuPtobottom:23136，9416，6557

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2937477