目的:構(gòu)建vpa0961基因突變株及其回補(bǔ)株,并初步探究VPA0961對副溶血弧菌運(yùn)動能力的調(diào)控作用。方法:以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增得到vpa0961的同源臂融合片段,并克隆至自殺質(zhì)粒pDS132多克隆位點(diǎn)。將pDS132重組質(zhì)粒通過結(jié)合轉(zhuǎn)移的方式轉(zhuǎn)入野生株,進(jìn)而通過同源重組方法替換原始vpa0961,制備vpa0961無痕突變株（Δvpa0961）。PCR擴(kuò)增vpa0961整個編碼區(qū)序列,并將其直接克隆入pBAD33質(zhì)粒,獲得重組回補(bǔ)質(zhì)粒。將回補(bǔ)質(zhì)粒結(jié)合轉(zhuǎn)移到Δvpa0961中,然后通過特異性引物PCR鑒定并外送測序以獲得回補(bǔ)株。將副溶血弧菌的預(yù)培養(yǎng)物接種于游動（swimming）和爬動（swarming）平板,37℃靜置培養(yǎng),比較不同菌株間菌苔直徑的差異。采用qRT-PCR分析鞭毛蛋白基因lafA、flaB和flaF的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:特異性擴(kuò)增及序列分析顯示,成功構(gòu)建vpa0961基因突變株和回補(bǔ)株;與野生株相比,Δvpa0961游動能力和爬動能力明顯減弱（t=14. 06,36. 37,P <0. 05）;與野生株相比... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019年03期

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

副溶血弧菌的運(yùn)動能力檢測2．4VPA0961正調(diào)控鞭毛基因的轉(zhuǎn)錄


本文編號：2935091