本文關(guān)鍵詞：豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗構(gòu)建及其免疫學(xué)特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究利用基因工程技術(shù)構(gòu)建豬帶絳蟲重組Bacillus Calmette-Guérin(BCG)-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表達(dá)情況;然后將重組BCG-TSOL18疫苗免疫昆明小鼠,動態(tài)觀察免疫小鼠血清特異性Ig G和Ig G2a的變化規(guī)律,脾淋巴細(xì)胞增殖水平及脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-2和IL-4的水平,為該疫苗的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法:將本室制備保存的重組質(zhì)粒p GEX-TSOL18經(jīng)Bam HⅠ和Eco RⅠ雙酶切后獲得TSOL18目的基因,再將其定向克隆至大腸桿菌-分枝桿菌穿梭表達(dá)載體p MV261中,構(gòu)建p MV261-TSOL18重組質(zhì)粒,采用電穿孔法將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BCG中,構(gòu)建豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗,并進(jìn)行PCR鑒定;將重組BCG-TSOL18疫苗經(jīng)45℃熱誘導(dǎo)表達(dá),通過SDS-PAGE鑒定和Western blot分析重組TSOL18蛋白的表達(dá)情況。然后將80只昆明小鼠隨機(jī)分成4組:(1)腹腔注射組,接種5×106克隆形成單位(CFU)重組BCG-TSOL18疫苗100μl;(2)口服灌胃組,接種4×108 CFU重組BCG-TSOL18疫苗100μl;(3)和(4)分別為BCG和PBS對照組。于疫苗免疫后0、2、4、6和8w,收集血清和脾淋巴細(xì)胞,采用ELISA法檢測血清特異性Ig G和Ig G2a水平及脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-2和IL-4水平;采用CCK-8法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖水平。結(jié)果:重組質(zhì)粒p GEX-TSOL18經(jīng)雙酶切鑒定成功獲得393bp TSOL18目的基因;重組質(zhì)粒p MV261-TSOL18經(jīng)雙酶切、PCR和測序證實(shí)構(gòu)建成功;重組BCG-TSOL18疫苗經(jīng)PCR證實(shí)構(gòu)建成功;SDS-PAGE證實(shí)重組質(zhì)粒p MV261-TSOL18在BCG中經(jīng)熱誘導(dǎo)后能夠表達(dá)相對分子質(zhì)量(Mr)約為14.7k Da的重組TSOL18目的蛋白,Western blot分析示該重組蛋白有特異的抗原性。動態(tài)觀察表明:疫苗腹腔注射組和口服灌胃組小鼠血清特異性Ig G和Ig G2a水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w達(dá)較高水平;脾淋巴細(xì)胞增殖水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w達(dá)較高水平;脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-2和IL-4水平均在免疫后2~8w和4~6w升高,均在免疫后 6w和4w達(dá)較高水平。結(jié)論:1.成功構(gòu)建了豬帶絳蟲重組質(zhì)粒p MV261-TSOL18。2.成功構(gòu)建了豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗。3.豬帶絳蟲TSOL18基因能在BCG中誘導(dǎo)表達(dá),且表達(dá)的重組TSOL18蛋白具有特異的抗原性。4.豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：豬帶絳蟲 重組BCG-TSOL18疫苗 構(gòu)建 表達(dá) 免疫學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-14
• 第一章 豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗構(gòu)建及其表達(dá)研究14-35
• 材料14-20
• 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 結(jié)果28-32
• 討論32-35
• 第二章 豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗免疫學(xué)特性研究35-51
• 材料與方法35-40
• 結(jié)果40-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述56-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-69
• 作者簡介69

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  本文關(guān)鍵詞：豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗構(gòu)建及其免疫學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：293409