目的探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）4/Smad信號通路在小鼠原始卵泡卵母細(xì)胞凋亡中的調(diào)控作用。方法取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢,采用兩步酶消化法,分離純化卵母細(xì)胞,進(jìn)行原代培養(yǎng)。將卵母細(xì)胞分為3組:正常對照組（Con組）、添加重組人BMP4組（BMP4組）、添加BMP4和BMP4抑制劑6-{4-[2-（1-呱啶基）乙氧基]苯基}-3-（4-吡啶基）吡唑并（1,5-A）嘧啶（dorsomorphin）組（BMP4+抑制劑組）。采用TUNEL法,檢測BMP4對卵母細(xì)胞凋亡的影響;采用免疫組織化學(xué)染色與實時定量PCR,檢測BMP4對卵母細(xì)胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、ckit及foxo3a表達(dá)的影響。采用RNA干擾技術(shù)、轉(zhuǎn)染sohlh2質(zhì)粒和LY294002處理,探討B(tài)MP4/Smad信號通路在小鼠原始卵泡卵母細(xì)胞凋亡中的調(diào)控機(jī)制。結(jié)果 TUNEL結(jié)果顯示,BMP4組凋亡卵母細(xì)胞比例明顯低于Con組（P<0.05）和BMP4+抑制劑組（P<0.05）;加入BMP4可明顯促進(jìn)細(xì)胞Smad入核,上調(diào)sohlh2和c-kit表達(dá),抑制foxo3a入核;轉(zhuǎn)染sohlh2 siR... 

【文章來源】：解剖學(xué)報. 2014年03期 北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

BMP4處理后各組卵母細(xì)胞凋亡的比例分析

虰MP4+抑制劑組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);c-kit的表達(dá)主要分布于卵母細(xì)胞的胞質(zhì)和細(xì)胞膜，細(xì)胞膜陽性著色更明顯，BMP4組c-kit陽性表達(dá)也高于Con組和BMP4+抑制劑組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);BMP4組卵母細(xì)胞胞核內(nèi)foxo3a的陽性表達(dá)明顯低于Con組和BMP4+抑制劑組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)(圖3，4A，4B)。2.2BMP4對卵母細(xì)胞中sohlh2、c-kit及foxo3amＲNA表達(dá)的影響培養(yǎng)48h后BMP4組的sohlh2和c-kit基因表達(dá)明顯高于Con組和BMP4+抑制劑組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);foxo3a在3組間的表達(dá)無明顯差別(圖4C)。圖4BMP4影響卵母細(xì)胞p-Smad、sohlh2、c-kit、Foxo3a蛋白及mＲNA水平的表達(dá)A為卵母細(xì)胞sohlh2、c-kit平均吸光度比較;B為卵母細(xì)胞p-Smad、foxo3a入核比例;C為實時定量PCＲ檢測卵母細(xì)胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表達(dá)水平;與Con組比較，*P＜0.05，與BMP4組比較，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group圖6Sohlh2siＲNA轉(zhuǎn)染后凋亡卵母細(xì)胞比例分析與siCon組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與siCon+BMP4組比較，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA轉(zhuǎn)染后卵母細(xì)胞凋亡情況細(xì)胞轉(zhuǎn)染sohlh2siＲNA24h后，實時定量PCＲ結(jié)果顯示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)為有效的sohlh2siＲNA

胞sohlh2、c-kit平均吸光度比較;B為卵母細(xì)胞p-Smad、foxo3a入核比例;C為實時定量PCＲ檢測卵母細(xì)胞sohlh2、c-kit、foxo3amＲNA表達(dá)水平;與Con組比較，*P＜0.05，與BMP4組比較，#P＜0.05Fig．4BMP4affectsontheexpressionlevelofp-Smad，sohlh2，c-kit，foxo3aproteinandmＲNAinoocytesA，Averageabsorbanceofsohlh2andc-kitinoocytes;B，Theanalysisoftheratioofendonuclearp-Smadandfoxo3ainoocytes;C，Expressionlevelofsohlh2，c-kitandfoxo3amＲNAinoocytesbyqＲT-PCＲ;*P＜0.05，vscontrolgroup，#P＜0.05，vsBMP4group圖6Sohlh2siＲNA轉(zhuǎn)染后凋亡卵母細(xì)胞比例分析與siCon組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與siCon+BMP4組比較，##P＜0.01Fig．6Theanalysisoftheratioofapoptoticoocytesaftersohlh2siＲNAtransfected，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;vssiCongroup，##P＜0.01，vssiCon+BMP4group3．sohlh2siＲNA轉(zhuǎn)染后卵母細(xì)胞凋亡情況細(xì)胞轉(zhuǎn)染sohlh2siＲNA24h后，實時定量PCＲ結(jié)果顯示，sohlh2siＲNA(1)、sohlh2siＲNA(2)為有效的sohlh2siＲNA，sohlh2siＲNA(1)的干擾效果更為明顯，因此選sohlh2siＲNA(1)以下實驗用的小干擾ＲNA。TUNEL結(jié)果顯示，與siCon組比較，siCon+BMP4組卵母細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著減少(P＜0.05)，siSohlh2組凋亡的卵母細(xì)胞明顯增加(P＜0.01);siSohlh2+BMP4組卵母細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著高于siCon+BMP4組(P＜0.01)(圖5，6)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與siCon組比較，siSohlh2組Sohlh2和

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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