背景：由于神經(jīng)干細(xì)胞能夠自我復(fù)制并能產(chǎn)生各種類型的神經(jīng)細(xì)胞，它將在神經(jīng)系統(tǒng)疾病進(jìn)行細(xì)胞治療中發(fā)揮重要的作用。然而目前神經(jīng)干細(xì)胞在體外的擴(kuò)增極其有限，這給它在研究和臨床應(yīng)用方面帶來(lái)極大的不便。通過(guò)轉(zhuǎn)端粒酶建立永生神經(jīng)干細(xì)胞系是解決該問(wèn)題的一個(gè)很好的方法，但轉(zhuǎn)端粒酶是否會(huì)使神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化則是人們擔(dān)心的另一個(gè)問(wèn)題。而bFGF對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化有著重要的作用，然而它如何實(shí)現(xiàn)這兩種不同作用是值得深入去研究的。 目的：鑒定實(shí)驗(yàn)室建立的轉(zhuǎn)端粒酶永生化神經(jīng)干細(xì)胞系(HNG和HNG-E)。研究bFGF在神經(jīng)干細(xì)胞中的增殖和分化作用。 方法：通過(guò)成瘤實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分析、Fluo-3鈣內(nèi)流實(shí)驗(yàn)、基因芯片、細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、RT-PCR和Western blot等方法對(duì)HNG和HNG-E細(xì)胞進(jìn)行鑒定；通過(guò)將重組bFGF表達(dá)載體(包括pRevTRE／IgK-bFGF和pcDNA3.1(-)／bFGF)轉(zhuǎn)入神經(jīng)干細(xì)胞和HNG-E細(xì)胞中，并用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和Western blot對(duì)其進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：HNG細(xì)胞表達(dá)外源端粒酶，同時(shí)不具有致瘤性。它為CD90陽(yáng)性細(xì)胞，并能共表達(dá)Nestin和GFAP，經(jīng)RA誘導(dǎo)后可表達(dá)MAP2和01(oligophrenin-1)。HNG—E細(xì)胞來(lái)自早期HNG細(xì)胞，具有致瘤性，并失去HNG細(xì)胞的原有的表型，但能在RA誘導(dǎo)下表達(dá)多巴胺受體2。轉(zhuǎn)入bFGF表達(dá)載體到神經(jīng)干細(xì)胞后，細(xì)胞沒(méi)有增殖而發(fā)生分化。轉(zhuǎn)入bFGF表達(dá)載體到HNG-E細(xì)胞建立HNG-E＼bFGF。HNG-E＼bFGF表達(dá)外源bFGF，并表達(dá)GFAP。 暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘 要 結(jié)論：經(jīng)鑒定，證實(shí)HNG細(xì)胞為具有神經(jīng)干細(xì)胞表型的永生化細(xì)胞系。而HNG－E則為發(fā)生 轉(zhuǎn)化的神經(jīng)干細(xì)胞系，但能在RA誘導(dǎo)下向多巴胺能神經(jīng)元分化。bFGF轉(zhuǎn)入神經(jīng)干細(xì)胞后 能促使其向神經(jīng)元方向分化。而bFGF對(duì)HNG－E細(xì)胞具有雙向功能，一方面在培養(yǎng)基中加 入bFGF能夠促進(jìn)HNG－E細(xì)胞的增殖，另一方面將外源bFGF轉(zhuǎn)入HNG－E細(xì)胞中表達(dá)又能夠 使其表型發(fā)生變化具有神經(jīng)干細(xì)胞的表型。
【學(xué)位單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

圖1.端粒結(jié)構(gòu)示意圖2.3端粒酶(Telomerase)人端粒酶是一種核糖核蛋白酶，包括了兩個(gè)主要的亞基:1.RNA組分(hTERC)，它多聚酶反應(yīng)的模板;2.具有反轉(zhuǎn)錄酶活性的催化亞單位(hTERT)。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了，存在hTERc和hTERT就足以重建端粒酶的活性�！�41j而許多研究表明外源性hTERT的表足以恢復(fù)端粒酶陰性細(xì)胞中端粒酶的活性。仁42一44j端粒酶能以自身的RNA為模板，逆轉(zhuǎn)成人類端粒DNA重復(fù)序列TTAGGG并添加于染色體3’末端，從而阻止了每次細(xì)胞分裂粒序列的丟失，維持了染色體長(zhǎng)度的穩(wěn)定(端粒酶延長(zhǎng)端粒見(jiàn)圖2)。端粒酶在生物體內(nèi)的表達(dá)受到多種蛋白質(zhì)反式作用的調(diào)控。如p53蛋白可能通過(guò)定端粒的T一環(huán)上而降低了TERT基因的轉(zhuǎn)錄，而HPV16E6的基因產(chǎn)物則能增加該基因的轉(zhuǎn)�！�35，‘5，‘6〕近期的研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶在體內(nèi)表達(dá)受到C一MYc的直接調(diào)控。由于在TERT啟動(dòng)有許多C一MYC結(jié)合位點(diǎn)，這些位點(diǎn)與TERT的轉(zhuǎn)錄有關(guān)。因此CesesMYC所誘導(dǎo)的TERT的表達(dá)行TE因�！仓菀话紫喽绊�

圖2.端粒酶延長(zhǎng)端粒示意圖端粒長(zhǎng)度與細(xì)胞衰老和永生化的假說(shuō)前關(guān)于端粒長(zhǎng)度與細(xì)胞死亡期的關(guān)系存在一些假說(shuō)�！�49j在正常的來(lái)自多種組性的非永生化細(xì)胞中，存在至少兩個(gè)端粒依賴的致死期。第一個(gè)致死期又稱被認(rèn)為是由于檢查點(diǎn)的捕獲所致。它可能是通過(guò)因關(guān)鍵端粒的缺失或者是一體末端的去帽作用而引起的DNA損傷反應(yīng)所致。如果細(xì)胞缺失這個(gè)檢查點(diǎn)或長(zhǎng)控制突變，細(xì)胞就會(huì)通過(guò)第一死亡期而繼續(xù)分裂，使端粒DNA不斷減少，期(或稱危機(jī)期)為止。(見(jiàn)圖3)危機(jī)期的表征是1.主要端粒失去功能2，3.出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。

圖2.端粒酶延長(zhǎng)端粒示意圖.2.4端粒長(zhǎng)度與細(xì)胞衰老和永生化的假說(shuō)目前關(guān)于端粒長(zhǎng)度與細(xì)胞死亡期的關(guān)系存在一些假說(shuō)。〔49j在正常的來(lái)自多種組織的酶陰性的非永生化細(xì)胞中，存在至少兩個(gè)端粒依賴的致死期。第一個(gè)致死期又稱復(fù)制老，被認(rèn)為是由于檢查點(diǎn)的捕獲所致。它可能是通過(guò)因關(guān)鍵端粒的缺失或者是一個(gè)或染色體末端的去帽作用而引起的DNA損傷反應(yīng)所致。如果細(xì)胞缺失這個(gè)檢查點(diǎn)或是發(fā)化生長(zhǎng)控制突變，細(xì)胞就會(huì)通過(guò)第一死亡期而繼續(xù)分裂，使端粒DNA不斷減少，直至致死期(或稱危機(jī)期)為止。(見(jiàn)圖3)危機(jī)期的表征是1.主要端粒失去功能2，遺穩(wěn)定3.出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。
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6 吳勵(lì);古麗尼沙·克力木;胡漢華;王士平;吐爾遜江·達(dá)地汗;;人胚胎三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞電鏡及光鏡觀察[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年05期

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8 李秀芝，嚴(yán)悅卿，金海燕，龍治峰;人胚胎主動(dòng)脈早期病變的觀察[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;1995年02期

9 齊亞靈,劉東璞,趙文杰,王柏欣,王景霞;16～32周胎齡黑龍江人胎外部測(cè)量及分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2002年02期

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本文編號(hào)：2872215