Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細(xì)胞命運決定，故此與多種生理及病理過程密切相關(guān)。Notch基因廣泛表達(dá)于胚胎發(fā)育過程中的各種組織和各種成熟組織中具有增殖能力的細(xì)胞層，該基因編碼一個由2753個氨基酸殘基的Ⅰ型跨膜蛋白分子受體，其配體也是細(xì)胞膜蛋白，稱為Delta。當(dāng)Notch受體受到配體的刺激而激活時，可以傳導(dǎo)分化抑制信號。人們將該途徑稱為Notch途徑，Notch途徑中最核心的信號分子之一為RBP-J。 RBP-J是果蠅促神經(jīng)發(fā)生基因Su(H)(suppressor of hairless)在哺乳動物的同源物，RBP-J基因敲除小鼠在胚胎第9天死亡，同時伴隨一系列異常，包括神經(jīng)發(fā)育過度及體節(jié)發(fā)育的缺陷，說明RBP-J在哺乳動物胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。 為進(jìn)一步探討RBP-J的功能，日本京都大學(xué)的Honjo研究組利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選到一個可以與RBP-J相互作用的新蛋白KyoT，KyoT蛋白有三種不同的剪切體：KyoT1，KyoT2和KyoT3，其中KyoT2可以與RBP-J相互作用抑制其轉(zhuǎn)錄活性。 付包馳 蘿 回 旱 匡大紗甩亡學(xué)應(yīng)恃大2咖．53 為深入研究KyoTh在NOtCh－RBPJK途徑中的可能作用及其作用機制，本實 驗室以 KyOTh為誘餌蛋白通過酵母雙雜交得到人類緊密連接蛋白 ZOE。緊密連 接Oigh junchon）又稱封閉小帶仁onula occludens），主要是存在于脊椎動物上皮 細(xì)胞間以及內(nèi)皮細(xì)胞間的連接，其主要功能為封閉相鄰細(xì)胞間的縫隙，限制一些 大分子在細(xì)胞間隙中的自由擴散，同時防止膜蛋白的側(cè)向流動，使膜蛋白定位于 質(zhì)膜的一定區(qū)域，從而維持細(xì)胞極性。ZO－2位于緊密連接處的質(zhì)膜內(nèi)表面，一方 面與構(gòu)成緊密連接的跨膜蛋白相互作用，另一方面與細(xì)胞骨架發(fā)生聯(lián)系。因此 ZO－2的生物學(xué)作用可能參與緊密連接形成和功能調(diào)節(jié)，經(jīng)細(xì)胞骨架而影響細(xì)胞的 形態(tài)和運動。 本實驗通過酵母雙雜交及 GST pull－down as腳驗證了 KyO TZ蛋白與 ZOz蛋 白在體外的相互作用，并通過酵母雙雜交實驗初步確定其相互作用的位點。即 ZO4可以與 KyOTZ的 LM結(jié)構(gòu)域發(fā)生特異性的結(jié)合，而不與 KyOTh的 LIMI 結(jié)構(gòu)域或 KyOTI的 LIMI及 LIMZ結(jié)構(gòu)域相互作用。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：Q51
【文章目錄】：
英文縮寫詞表
中文摘要
英文摘要
文獻(xiàn)回顧
    1. 研究蛋白質(zhì)相互作用的方法
    2. Notch信號途徑
    3. LIM結(jié)構(gòu)域蛋白KyoT2
    4. 細(xì)胞間連接、緊密連接及緊密連接蛋白
實驗材料
    1. 菌種及質(zhì)粒
    2. 主要試劑
    3. 主要儀器
實驗方法
    1. 克隆構(gòu)建
    2. 序列測定及分析
    3. 蛋白表達(dá)純化
    4. 酵母雙雜交
    5. GST pull-down
實驗結(jié)果
    1. 6號序列的測定
    2. 6號序列的分析結(jié)果
    3. KyoT2的原核表達(dá)及純化
    4. 酵母雙雜交實驗驗證KyoT2與ZO-2的相互作用
    5. GST pull-down實驗驗證KyoT2與ZO-2的相互作用
    6. 酵母雙雜交實驗驗證KyoT2與ZO-2的相互作用位點
討論
    1. 關(guān)于LIM結(jié)構(gòu)域蛋白及KoyT2分子
    2. 關(guān)于緊密連接及ZO-2分子
    3. 關(guān)于KyoT2與ZO-2的相互作用
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王東;高飛;;高血壓腦出血后腦水腫及腦損傷發(fā)生機制的研究進(jìn)展[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年04期

2 張中偉;秦環(huán)龍;;腸上皮細(xì)胞緊密連接的結(jié)構(gòu)及功能研究進(jìn)展[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2005年06期

3 白楊;張學(xué)淵;;緊密連接蛋白o(hù)ccludin和ZO-1在豚鼠耳蝸外側(cè)壁血管紋中的表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年11期

4 蘆軍萍,王懷立;黏附分子與中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染[J];國外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊);2002年02期

5 邱聯(lián)波;丁桂榮;譚娟;郭國禎;;電磁脈沖致大鼠血腦屏障通透性增加過程中actin的作用[J];中華疾病控制雜志;2010年06期

6 劉曾旭;余慶;王向東;王航輝;萬斌;劉德明;;嚴(yán)重燙傷大鼠腦內(nèi)MMP-9及NOS表達(dá)變化及意義[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2010年02期

7 曹惠鵑;孫瑩杰;張鐵錚;周錦;姚婧;;體外循環(huán)對大鼠血腦屏障及緊密連接蛋白表達(dá)的影響[J];中國體外循環(huán)雜志;2011年02期

8 曹珊;王晶桐;劉玉蘭;;胃腸道黏膜屏障與自身免疫性疾病[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2007年02期

9 茅銳;王振華;;缺血再灌注對血腦屏障緊密連接蛋白的影響[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2010年03期

10 陳德宇,黃宇烽;支持細(xì)胞緊密連接與男性避孕[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2005年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 樊凱芳;三化湯調(diào)氣開通玄府治療急性中風(fēng)病的機理研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 陳祎招;腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞對血腦屏障的作用及其分子機制[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

3 呂颯;暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型中腫瘤壞死因子α對血腦屏障通透性及緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

4 徐海峰;高糖對視網(wǎng)膜色素上皮屏障與轉(zhuǎn)運功能的影響[D];青島大學(xué);2005年

5 徐鵬輝;腸黏膜上皮細(xì)胞與免疫細(xì)胞相互作用的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

6 李立新;腫瘤壞死因子α對暴發(fā)性肝衰竭血腦屏障緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

7 王應(yīng)利;視網(wǎng)膜周細(xì)胞對微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長和緊密連接形成影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 郭斌;體外內(nèi)層血視網(wǎng)膜屏障模型中緊密連接與細(xì)胞旁通透性變化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 鮑歡;缺氧對血腦屏障的影響及其分子機制[D];蘇州大學(xué);2006年

10 崔巍;腫瘤壞死因子alpha增加腸上皮細(xì)胞屏障通透性的機制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高飛;阿托伐他汀對大鼠高血壓腦出血治療作用機制的實驗研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2010年

2 羅榮華;新生兒缺氧缺血性腦病血清可溶性細(xì)胞間黏附分子-1和白細(xì)胞介素-8水平的動態(tài)變化[D];青島大學(xué);2003年

3 孫穎;中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者腦脊液suPAR和sICAM-1的變化及意義[D];山東大學(xué);2005年

4 吳松笛;缺血再灌注對大鼠血腦屏障的損害及通心絡(luò)超微粉的保護(hù)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 李飛;不同腦溫對樹鼩局部腦缺血海馬VEGF表達(dá)的影響及機制探討[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

6 謝曉利;七葉皂苷鈉抗大鼠腦出血后腦水腫作用機制的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

7 王玲;益氣活血法對腦出血大鼠腦內(nèi)MT1-MMP、MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2007年

8 李杰;rt-PA與尿激酶溶栓對MMP-9及腦出血性轉(zhuǎn)化的對比研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

9 周翔;雙氧水沖洗對腦組織影響的初步探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

10 李春艷;缺血后適應(yīng)對大鼠腦缺血/再灌注損傷的影響[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

本文編號：2867332