在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的眾多調(diào)節(jié)過(guò)程中，蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化是十分重要的環(huán)節(jié)，特定細(xì)胞蛋白質(zhì)酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要調(diào)節(jié)機(jī)制，它是細(xì)胞間通信、細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖、細(xì)胞周期調(diào)控、分化、惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)傳導(dǎo)、血管形成、胚胎形成和許多遺傳病及后天人類疾病的一個(gè)關(guān)鍵步驟。對(duì)蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化的研究已經(jīng)成為生命科學(xué)的研究熱點(diǎn)。 SPAP2是免疫受體家族中一個(gè)包含兩個(gè)ITIM和兩個(gè)ITAM的跨膜蛋白質(zhì)，SPAP2的細(xì)胞外部分包括6個(gè)免疫球蛋白樣的結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞內(nèi)部分含有兩個(gè)ITIM和兩個(gè)ITAM， SPAP2的基因包含16個(gè)外顯子，定位于人類lq21號(hào)染色體上，全長(zhǎng)的SPAP2共734個(gè)氨基酸殘基，細(xì)胞內(nèi)片段有137個(gè)氨基酸殘基。當(dāng)有細(xì)胞外信號(hào)刺激并激活SPAP2時(shí)，鑲嵌在其細(xì)胞內(nèi)部的兩個(gè)ITIM和兩個(gè)ITAM之中的酪氨酸發(fā)生磷酸化，能夠誘導(dǎo)胞漿內(nèi)的SH2-domain containing PTP和PTK由胞漿向細(xì)胞膜遷移，并且結(jié)合到磷酸化的ITIM和ITAM上，繼續(xù)進(jìn)行下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)�？梢�(jiàn)研究SPAP2對(duì)于揭示SH2-domain containing PTP的生理功能，以及通過(guò)研究SPAP2來(lái)發(fā)現(xiàn)與其結(jié)合的其它PTP和PTK有重要意義。 SPAP2基因細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的克隆表達(dá) 我們利用基因工程技術(shù)成功地克隆了SPAP2CT基因，并且構(gòu)建了可溶性表達(dá)載體pGex-2T-SPAP2CT質(zhì)粒，經(jīng)序列測(cè)定結(jié)果正確；將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化E. coli DE3-LysS，獲得了高表達(dá)菌株并進(jìn)行了高效表達(dá)。 WP=63 2．SPAP2細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的分離純化鑒定 我們應(yīng)用離子交換、親和層析等技術(shù)分離得到了GST-SPAP2CT，經(jīng)SDS-PAGE分析，其純度大于90%，通過(guò)Western blot驗(yàn)證，我們得到的蛋白質(zhì)就是目的蛋白質(zhì)GST-SPAP2CT。 3. SPAP2多克隆抗體的制備 我們用純化得到的GST-SPAP2CT免疫昆明種小白鼠，通過(guò)負(fù)選擇親和層析柱和PVDF固定抗原親和層析柱制備純化的到了抗SPAP2CT的抗體，經(jīng)ECL檢測(cè)抗體效價(jià)，符合下一步實(shí)驗(yàn)需要，在-20 oC冰箱保存抗體。 4. SPAP2的功能研究 我們利用免疫沉淀和Western blot等生物學(xué)研究手段，對(duì)家兔不同組織中SPAP2的表達(dá)差異進(jìn)行分析，同時(shí)我們也分析了在各個(gè)發(fā)育階段小鼠多種臟器中SPAP2表達(dá)水平的變化，結(jié)果表明，在腎臟和腎上腺中SPAP2表達(dá)量很高，在肺和胰腺中SPAP2表達(dá)量較高，在心臟和肝臟中也有表達(dá)，但量很低。由此可見(jiàn)，SPAP2在腺體中高表達(dá)可能與調(diào)節(jié)腺體的分泌功能有關(guān)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R341
【文章目錄】：
前 言
第一部分 SPAP2基因細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的克隆表達(dá)
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    1.3 結(jié)果與討論
    1.4 小結(jié)
第二部分 SPAP2細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的分離純化鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果與討論
    2.4 小結(jié)
第三部分 SPAP2多克隆抗體的制備
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與討論
    3 4小結(jié)
第四部分 SPAP2的功能研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果與討論
    4.4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致 謝
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英文摘要

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1 朱茂祥,吳國(guó)利;蛋白質(zhì)酪氨酸脫磷酸化和信號(hào)傳導(dǎo)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1993年02期

本文編號(hào)：2865500