為了調(diào)查HBV基因組nt551位變異株在乙型肝炎患者中的分布，共收集HBV血清學(xué)診斷陽性且肝功能異常的乙型肝炎患者血清標(biāo)本362份，用巢式PCR方法擴(kuò)增到117例HBV S基因陽性的標(biāo)本。根據(jù)已知的48個HBV的基因組序列和中國主要的流行亞型(adr和adw)，設(shè)計合成了3’末端(上游引物)不同的四套引物P551A-PPS、P551G-PPS、P551C-PPS和P551T-PPS。在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上，探索了擴(kuò)增HBV基因組nt551位突變的特異性聚合酶鏈反應(yīng)(msPCR)。在優(yōu)化試驗(yàn)條件中以調(diào)整退火溫度和引物濃度為主。根據(jù)引物的Tm值，將退火溫度由65℃開始由低到高逐步調(diào)整，至70℃時，仍然存在不同程度地非特異性擴(kuò)增。在退火溫度為71℃、引物濃度為800nmol/L(25μl的反應(yīng)體系)時，引物nt551A和nt551G分別可產(chǎn)生HBV DNA特異性擴(kuò)增條帶。在退火溫度為72℃和引物濃度為200nmol/L(25μ1的反應(yīng)體系)時，引物nt551C和nt551T分別可產(chǎn)生HBV DNA特異性擴(kuò)增。首先，采用這種msPCR方法對16份HBV S基因陽性標(biāo)本進(jìn)行檢測，結(jié)果14份為nt551A，另外2份分別為nt551G和nt551T。DNA序列分析肯定了這一結(jié)果。初步證明該法用于鑒定HBV基因組nt551位變異株的特異性和敏感性。進(jìn)一步利用該msPCR方法對另外101份HBV S基因陽性標(biāo)本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)nt551位為A的標(biāo)本98例，為G的3例。綜合上述結(jié)果，在117例HBV S基因陽性的標(biāo)本中，nt551位為G的變異株有4例，占3.42％；nt551位為C的變異株為0；nt551位為T的罕見adr亞型野生株有1例，占0.85％；nt551位為A的野生株有112例，占95.73％。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要（含關(guān)鍵詞）
英文摘要（含關(guān)鍵詞）
前言
第一部分 檢測HBV基因組nt551位突變的特異性PCR的建立
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 應(yīng)用msPCR方法調(diào)查HBV S基因nt551位突變株的分布
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述與參考文獻(xiàn)
論文

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 房德興，甘人寶，李載平，段恕誠;乙型肝炎病毒的表面抗原126位Ilie→Ser變異株[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報;1996年04期

本文編號：2865073