目的探討乙肝病毒X蛋白(HBx)對條件永生型小鼠足細胞系(MPC5)增殖與凋亡的影響。方法用攜帶HBx基因的pEX質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MPC5細胞,實時熒光定量PCR(RT-qPCR)驗證轉(zhuǎn)染效率。實驗分空白對照組(MPC5 group)、陰性對照組(MPC5-pEX-neo group)、HBx轉(zhuǎn)染組(MPC5-pEX-HBx group)。MTT法檢測足細胞存活率;流式細胞計量術(shù)檢測細胞凋亡;Western blot檢測細胞中nephrin、STAT3、JAK2、p-STAT3和p-JAK2、caspase-3蛋白表達。結(jié)果 HBx轉(zhuǎn)染MPC5細胞48 h后HBx表達最高。HBx轉(zhuǎn)染組中nephrin蛋白表達水平顯著低于空白對照及陰性對照(均P0.01)。轉(zhuǎn)染HBx基因后足細胞增殖明顯受抑,同時凋亡率顯著增高(均P0.01)。此外,HBx轉(zhuǎn)染組STAT3、p-STAT3、JAK2和p-JAK2蛋白表達較空白對照及陰性對照組均顯著增高(均P0.01), caspase-3在HBx轉(zhuǎn)染組中的表達也顯著增高(均P0.01)。結(jié)論 HBx可下調(diào)足細胞中nephrin蛋白表達,抑制足細胞增殖,并促進其凋亡的發(fā)生。其作用機制可能與STAT3/JAK2信號通路活化有關(guān)。
【部分圖文】：

Bx基因在MPC5細胞中的轉(zhuǎn)染效率Table2EfficiencyofHBxgenetransfectioninMPC5(x±s，n=3)groupmＲNA12hours24hours48hours72hoursMPC50.48±0.140.51±0.120.54±0.120.44±0.10MPC5-pEX-neo0.53±0.130.65±0.110.64±0.200.58±0.21MPC5-pEX-HBx0.64±0.11*#18.3±0.25＊＊##593.42±0.56＊＊##88.59±0.33＊＊##*P＜0.05，＊＊P＜0.01comparedwithMPC5group;#P＜0.05，##P＜0.01comparedwithMPC5-pEX-neogroup．*P＜0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroup圖1HBx轉(zhuǎn)染足細胞后nephrin蛋白表達Fig1NephrinexpressionlevelafterpodocytewastransfectedwithHBx(x±s，n=3)916

基礎醫(yī)學與臨床Basic＆ClinicalMedicine2019.39(5)*P＜0.01comparedwithMPC5andMPC5-pEX-neogroups圖2不同組別足細胞的存活率的比較Fig2Survivalrateofpodocyteindifferentgroups(x±s，n=3)2.4轉(zhuǎn)染HBx對足細胞凋亡的影響HBx轉(zhuǎn)染組細胞凋亡率較空白對照和陰性對照組細胞均顯著增高(P＜0.01)(圖3)。2.5高表達HBx后足細胞STAT3、p-STAT3、JAK2及p-JAK2表達增高，caspase-3表達上調(diào)轉(zhuǎn)染HBx后STAT3及p-STAT3蛋白表達較空白對照及陰性對照組均增高(P＜0.01)，同時HBx轉(zhuǎn)染組中JAK2及p-JAK2蛋白表達水平也顯著增高(P＜0.01)，同步檢測凋亡相關(guān)蛋白caspase-3(17ku)，其切割產(chǎn)物在HBx轉(zhuǎn)染組中表達顯著上調(diào)(P＜0.01)(圖4)。3討論HBx基因是HBV復制所必須的轉(zhuǎn)錄因子，可促進病毒復制，誘導細胞凋亡，在細胞轉(zhuǎn)化、增殖中起重要作用。由于HBx廣泛的反式激活特性，對腎小球足細胞、系膜細胞及腎小管上皮細胞都存在影響［6］，HBV-GN患兒的腎小球內(nèi)均存在不同程度的HBx表達，其主要分布于腎小球足細胞胞質(zhì)，足細胞胞核內(nèi)也有少量表達［7］，這決定了其在HBV-GN的發(fā)病機制中具有重要的作用。足細胞轉(zhuǎn)染HBx48h后HBx表達量最高，而HBx轉(zhuǎn)染組足細胞增殖效率明顯低于對照組，這表明HBx具有抑制足細胞增殖的作用，這一結(jié)果報道相一致［7］。Nephrin蛋白表達的變化是足細胞損傷的主要標志物之一，在維持足細胞骨架及足細胞裂孔膜的完整性方面具有重要作用［8］，也是蛋白尿產(chǎn)生的主要機制［9］。本實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染HBx后MP
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