發(fā)布時(shí)間：2020-10-30 02:56

　　 我國(guó)屬于甲、乙型肝炎高發(fā)區(qū),主要靠接種甲、乙型肝炎疫苗加以預(yù)防,由于現(xiàn)有的疫苗生產(chǎn)成本高,接種次數(shù)多等特點(diǎn),使得這些疫苗難以推廣應(yīng)用,特別在貧困地區(qū),需要研制一種安全、高效、方便和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)的甲、乙型肝炎雙價(jià)疫苗。目前,利用減毒沙門(mén)氏菌作為載體的多價(jià)DNA 口服疫苗,具有生產(chǎn)、免疫方便等優(yōu)良特點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建甲、乙型肝炎病毒的融合抗原基因SVPX,首先進(jìn)行體外畢赤酵母細(xì)胞和CHO 細(xì)胞表達(dá)研究,結(jié)果表明,融合抗原基因在真核細(xì)胞里表達(dá)的蛋白具有甲、乙型肝炎抗原特性。構(gòu)建含融合抗原基因的重組DNA 疫苗,以減毒沙門(mén)氏菌載體,進(jìn)行小鼠口服免疫研究,結(jié)果表明,重組DNA 疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)兩種抗原特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。同時(shí),用IL-18 作為基因佐劑,能夠進(jìn)一步增強(qiáng)體液和細(xì)胞免疫的作用。本實(shí)驗(yàn)首次進(jìn)行以減毒沙門(mén)氏菌為載體的甲、乙型肝炎口服二價(jià)DNA 疫苗的研究。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類(lèi)】：R392.1
【部分圖文】：

挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生長(zhǎng)的單克隆 Mut+表型，僅有極個(gè)別克隆呈現(xiàn) Muts表型。選取 Mut+表型。酵母表達(dá)質(zhì)粒的鑒定制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定與 PCR 鑒定酵母表達(dá)質(zhì)粒 pPICZαC-SVPX 進(jìn)行 EcoR I 與 Kpn I 雙酶切切和 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠電泳（見(jiàn)圖 1.2 和圖 1.3）。性重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后有兩條帶，一條與融合基因大�。�81條與空載體大小（3.6kb）相符的條帶。從圖 1.3 可見(jiàn)，陽(yáng)性 擴(kuò)增后，有與融合基因大小（813bp）相符的特異條帶。結(jié)果酵母表達(dá)質(zhì)粒 pPICZαC-SVPX。

挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生長(zhǎng)的單克隆 Mut+表型，僅有極個(gè)別克隆呈現(xiàn) Muts表型。選取 Mut+表型。酵母表達(dá)質(zhì)粒的鑒定制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定與 PCR 鑒定酵母表達(dá)質(zhì)粒 pPICZαC-SVPX 進(jìn)行 EcoR I 與 Kpn I 雙酶切切和 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠電泳（見(jiàn)圖 1.2 和圖 1.3）。性重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后有兩條帶，一條與融合基因大�。�81條與空載體大小（3.6kb）相符的條帶。從圖 1.3 可見(jiàn)，陽(yáng)性 擴(kuò)增后，有與融合基因大小（813bp）相符的特異條帶。結(jié)果酵母表達(dá)質(zhì)粒 pPICZαC-SVPX。

中表達(dá)情況的檢測(cè)清進(jìn)行 15% SDS-PAGE 電泳白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，進(jìn) Western blot 檢測(cè)結(jié)果中可見(jiàn)小相符的表達(dá)蛋白，且該蛋白因 SVPX 在酵母細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)表圖 1.6 RT-PCR 鑒定結(jié)果.6 Agarose gel electrophoresis of RT-L 2000 Marker；NA from the strain transformed with NA from the strain transformed with 1 2 3
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孟慶玲;減毒鼠傷寒沙門(mén)氏菌介導(dǎo)的斯氏艾美耳球蟲(chóng)DNA疫苗研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2861876