我國屬于甲、乙型肝炎高發(fā)區(qū),主要靠接種甲、乙型肝炎疫苗加以預防,由于現有的疫苗生產成本高,接種次數多等特點,使得這些疫苗難以推廣應用,特別在貧困地區(qū),需要研制一種安全、高效、方便和經濟等優(yōu)點的甲、乙型肝炎雙價疫苗。目前,利用減毒沙門氏菌作為載體的多價DNA 口服疫苗,具有生產、免疫方便等優(yōu)良特點。 本實驗構建甲、乙型肝炎病毒的融合抗原基因SVPX,首先進行體外畢赤酵母細胞和CHO 細胞表達研究,結果表明,融合抗原基因在真核細胞里表達的蛋白具有甲、乙型肝炎抗原特性。構建含融合抗原基因的重組DNA 疫苗,以減毒沙門氏菌載體,進行小鼠口服免疫研究,結果表明,重組DNA 疫苗能夠誘導機體產生針對兩種抗原特異性體液和細胞免疫反應。同時,用IL-18 作為基因佐劑,能夠進一步增強體液和細胞免疫的作用。本實驗首次進行以減毒沙門氏菌為載體的甲、乙型肝炎口服二價DNA 疫苗的研究。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R392.1
【部分圖文】：

挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平進行鑒定。結果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生長的單克隆 Mut+表型，僅有極個別克隆呈現 Muts表型。選取 Mut+表型。酵母表達質粒的鑒定制性內切酶雙酶切鑒定與 PCR 鑒定酵母表達質粒 pPICZαC-SVPX 進行 EcoR I 與 Kpn I 雙酶切切和 PCR 產物進行 1%瓊脂糖凝膠電泳（見圖 1.2 和圖 1.3）。性重組質粒經雙酶切后有兩條帶，一條與融合基因大�。�81條與空載體大小（3.6kb）相符的條帶。從圖 1.3 可見，陽性 擴增后，有與融合基因大小（813bp）相符的特異條帶。結果酵母表達質粒 pPICZαC-SVPX。

挑蘸 ZeocinTM平板上的克隆依次 Patch 到 MMH 和 MDH 平進行鑒定。結果表明，在 ZeocinTM抗性平板上生長的單克隆 Mut+表型，僅有極個別克隆呈現 Muts表型。選取 Mut+表型。酵母表達質粒的鑒定制性內切酶雙酶切鑒定與 PCR 鑒定酵母表達質粒 pPICZαC-SVPX 進行 EcoR I 與 Kpn I 雙酶切切和 PCR 產物進行 1%瓊脂糖凝膠電泳（見圖 1.2 和圖 1.3）。性重組質粒經雙酶切后有兩條帶，一條與融合基因大�。�81條與空載體大小（3.6kb）相符的條帶。從圖 1.3 可見，陽性 擴增后，有與融合基因大小（813bp）相符的特異條帶。結果酵母表達質粒 pPICZαC-SVPX。

中表達情況的檢測清進行 15% SDS-PAGE 電泳白質轉移到硝酸纖維素膜上，進 Western blot 檢測結果中可見小相符的表達蛋白，且該蛋白因 SVPX 在酵母細胞中實現表圖 1.6 RT-PCR 鑒定結果.6 Agarose gel electrophoresis of RT-L 2000 Marker；NA from the strain transformed with NA from the strain transformed with 1 2 3
【引證文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 孟慶玲;減毒鼠傷寒沙門氏菌介導的斯氏艾美耳球蟲DNA疫苗研究[D];甘肅農業(yè)大學;2008年

本文編號：2861876