乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝DNA病毒。在我國它是導(dǎo)致肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因。HBeAg是由HBV DNA前-C基因與C基因區(qū)共同編碼的一種非顆粒性的分泌蛋白，隨HBV復(fù)制而增加，臨床上將其作為判斷HBV活動(dòng)性復(fù)制的指標(biāo)之一。 為研究HBeAg在HBV感染后病毒致病過程中的作用，我們以分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建HBeAg的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)-HBeAg，以表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-HBeAg轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，以空載體pcDNA3.1(-)為平行對(duì)照，制備轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞裂解液。應(yīng)用抑制性消減雜交(suppression subtractive hybridization，SSH)技術(shù)， 構(gòu)建HBeAg激活相關(guān)基因差異表達(dá)的。DNA消減文庫，篩 選相關(guān)的靶基因片段，將產(chǎn)物與T/A載體連接，構(gòu)建CDNA 消減文庫，并轉(zhuǎn)染大腸桿菌進(jìn)行文庫擴(kuò)增，隨機(jī)挑選克 隆多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增后進(jìn)行測序及同源性分析。 對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞裂解液同時(shí)應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片技術(shù)對(duì) 差異表達(dá)mRNA進(jìn)行檢測和分析。篩選到的cDNA全長序 列，包括一些與細(xì)胞生長調(diào)節(jié)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白 質(zhì)翻譯合成、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生及物質(zhì)代謝密切相關(guān) 的蛋白編碼基因，推測了HBeAg在體內(nèi)可能存在的調(diào)控 機(jī)制的線索，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)未知功能的基因，命名為HBeAg 反式激活蛋白(HBeAgTP)。 在新基因功能的研究方面，我們對(duì)HBeAgTP進(jìn)行了 初步探討。從人肝癌細(xì)胞中得到了HBeAgTP基因的全長 編碼序列，構(gòu)建與綠色熒光蛋白融合的表達(dá)載體 PEGFP一HBeAgTP，通過基因與熒光蛋白基因融合表達(dá)，明 確它的亞細(xì)胞定位主要在細(xì)胞漿。進(jìn)一步應(yīng)用酵母雙雜 交技術(shù)篩選HBeAgTP與肝細(xì)胞文庫結(jié)合的蛋白，包括一 些與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的翻譯、免疫調(diào)節(jié)及物質(zhì)和能量代謝 相關(guān)的基因。對(duì)該基因的功能進(jìn)行初步研究，為下一步 更加具體的生物學(xué)功能、基因表達(dá)調(diào)控的深入研究開辟 道路。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
主要儀器設(shè)備
英文縮略詞
前言
第一部分 抑制性消減雜交技術(shù)篩選HBeAg反式調(diào)節(jié)基因
    引言
    第一節(jié) HBeAg表達(dá)載體的構(gòu)建
    第二節(jié) 抑制性消減雜交技術(shù)篩選HBeAg反式調(diào)節(jié)基因
    討論
第二部分 HBeAg反式調(diào)節(jié)基因的表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)
    引言
    討論
第三部分 HBeAgTP克隆化及功能學(xué)研究
    引言
    第一節(jié) HBeAg反式激活蛋白（HBeAgTP）的克隆化
    第二節(jié) HBeAgTP的亞細(xì)胞定位
    第三節(jié) HBeAgTP肝細(xì)胞內(nèi)結(jié)合蛋白的研究
    討論
總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號(hào)：2857318