發(fā)布時(shí)間：2017-04-04 10:04

  本文關(guān)鍵詞：脂多糖刺激臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞上調(diào)IL-1Ra、IL-37分泌的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素-1受體拮抗劑(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)、白介素-37(interleukin-37,IL-37)的影響。方法(1)采用組織塊法從臍帶華通膠組織中分離培養(yǎng)UC-MSCs。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UC-MSCs表面標(biāo)志物的表達(dá),鑒定UC-MSCs;檢測(cè)UC-MSCs細(xì)胞周期。(3)CCK-8(Cell Counting Kit)法檢測(cè)UC-MSCs的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。(4)實(shí)時(shí)定量熒光PCR(Real-time PCR)檢測(cè)UC-MSCs上TLR4 m RNA的表達(dá)。(5)LPS不同劑量刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme lin-ked immunosorbent assay,ELISA)分別從m RNA與蛋白水平檢測(cè)UC-MSCs對(duì)IL-1Ra、IL-37的分泌。(6)LPS不同時(shí)間刺激UC-MSCs后,Real-time PCR及ELISA分別從m RNA與蛋白水平檢測(cè)UC-MSCs對(duì)IL-1Ra、IL-37的分泌。(7)TAK-242阻斷TLR4后,Real-time PCR及ELISA分別從m RNA與蛋白水平檢測(cè)其對(duì)LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37的影響。結(jié)果采用組織塊法從臍帶華通膠組織分離培養(yǎng)UC-MSCs,于75cm2塑料培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),原代培養(yǎng)7~10 d后,觀察到組織周邊爬出貼壁細(xì)胞,呈長(zhǎng)梭形。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UC-MSCs表面標(biāo)志物,UC-MSCs陽性表達(dá)CD29和CD105,不表達(dá)CD14和CD34,符合UC-MSCs的生物學(xué)特征。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果表明,UCMSCs傳代培養(yǎng)在48-72 h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UC-MSCs細(xì)胞周期,觀察到G0/G1期占78.8%,S期占11.6%,G2/M期占9.6%,結(jié)果表明UC-MSCs大部分處于靜止?fàn)顟B(tài),其潛在的自我更新和增殖能力仍很強(qiáng)。Real-time PCR觀察到UC-MSCs上表達(dá)TLR4 m RNA。1μg/m L LPS作用于UC-MSCs后,從m RNA與蛋白水平檢測(cè)UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37呈時(shí)間依賴效應(yīng)(P0.05)。TAK-242阻斷TLR4后,LPS刺激UC-MSCs(即TAK-242+LPS組)較未阻斷組(LPS組)分泌IL-1Ra、IL-37水平減少,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),結(jié)果表明UC-MSCs對(duì)IL-1Ra與IL-37的分泌與TLR4激活有關(guān)。結(jié)論從臍帶華通膠組織中分離培養(yǎng)出原代細(xì)胞,經(jīng)鑒定為UC-MSCs;UC-MSCs陽性表達(dá)TLR4 m RNA;LPS可刺激UC-MSCs分泌抑炎細(xì)胞因子IL-1Ra、IL-37呈時(shí)間依賴效應(yīng),該過程主要依賴于TLR4。結(jié)果提示在炎癥環(huán)境中,UC-MSCs可能通過分泌抑炎細(xì)胞因子IL-1Ra、IL-37來調(diào)節(jié)免疫活動(dòng),發(fā)揮抑炎效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 Toll樣受體4 白介素-1受體拮抗劑 白介素-37
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及生物學(xué)性質(zhì)研究13-24
• 1 引言13
• 2 材料與方法13-18
• 2.1 主要儀器13-14
• 2.2 主要試劑14-15
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-23
• 3.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離及其培養(yǎng)18-20
• 3.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)20
• 3.3 鑒定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞20-21
• 3.4 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期21-22
• 3.5 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞周期22-23
• 4 小結(jié)23-24
• 第二部分 脂多糖刺激臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞上調(diào)IL-1Ra、IL-37分泌的研究24-47
• 1 引言24
• 2 材料與方法24-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器24-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑26-27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法27-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-46
• 3.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞上表達(dá)TLR4 mRNA35
• 3.2 LPS不同劑量刺激UC-MSCs表達(dá)IL-1Ra、IL-37 mRNA35-37
• 3.3 LPS不同劑量刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白37-40
• 3.4 LPS刺激UC-MSCs表達(dá)IL-1Ra、IL-37 mRNA呈時(shí)間依賴效應(yīng)40-41
• 3.5 LPS刺激UC-MSCs分泌IL-1Ra、IL-37蛋白呈時(shí)間依賴效應(yīng)41-43
• 3.6 TLR4介導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌IL-1Ra、IL-3743-46
• 4 小結(jié)46-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 文獻(xiàn)綜述57-68
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 附錄68-70
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果70-71
• 致謝71

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10 付文玉,路艷蒙,喬?hào)|訪,樸英杰;運(yùn)用組織工程學(xué)原理構(gòu)建間充質(zhì)干細(xì)胞的三維培養(yǎng)體系[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

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1 滿學(xué)杰;天津?yàn)I海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

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5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)在津建成[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　馮國(guó)梧;細(xì)胞產(chǎn)品國(guó)家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

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8 本報(bào)記者 王新佳;我國(guó)“原始間充質(zhì)干細(xì)胞”注射液進(jìn)入臨床研究[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國(guó)梧;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)規(guī)�；\(yùn)營(yíng)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 劉瑩清;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營(yíng)[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

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  本文關(guān)鍵詞：脂多糖刺激臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞上調(diào)IL-1Ra、IL-37分泌的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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