哺乳動(dòng)物的精子發(fā)生過程包括：精原細(xì)胞經(jīng)有絲分裂增殖分化為初級(jí)精母細(xì)胞，后者進(jìn)而經(jīng)過兩次減數(shù)分裂，分化為次級(jí)精母細(xì)胞直至精子細(xì)胞；精子細(xì)胞變態(tài)，再由圓形精子細(xì)胞發(fā)育為形似蝌蚪狀的成熟精子。而在上述過程中生精細(xì)胞主動(dòng)退化的重要機(jī)制就是細(xì)胞凋亡。這些過程受到多種因素的調(diào)節(jié)，但目前對(duì)其中涉及的分子機(jī)理尚未完全闡明。 絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在生精細(xì)胞增殖分化中的作用正日益受到人們的關(guān)注。作為細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)傳遞者，MAPK在細(xì)胞發(fā)育、分裂、凋亡以及細(xì)胞間功能同步過程中都發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中已證實(shí)至少有四個(gè)MAPK亞族，即ERK、JNK/SAPK、ERK5/BMK1和p38 MAPK。細(xì)胞內(nèi)每條MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路都具有相對(duì)獨(dú)立的功能，但各通路之間也存在著相互作用。其中，p38MAPK亞族在應(yīng)激、炎癥、細(xì)胞增殖分化以及凋亡中具有調(diào)節(jié)作用，因此已成為該領(lǐng)域近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。但目前對(duì)于p38 MAPK在小鼠睪丸發(fā)育過程中的表達(dá)及其變化尚未 —— 見研究。 為探討p38 MAPK在小鼠睪丸不同發(fā)育階段以及實(shí)驗(yàn)性隱宰 中的表達(dá)，我們進(jìn)行了以下研究： 應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡雜交技術(shù)和免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè) 1至7周齡小鼠睪丸p38 MAPK的表達(dá)及發(fā)育變化，并通過圖像 分析技術(shù)對(duì)免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 建立小鼠單側(cè)隱睪模型，并以未手術(shù)側(cè)拳丸作為對(duì)照。應(yīng)用 免疫組織化學(xué) SABC法檢測(cè)隱睪術(shù)后 5、10、15、20天各組標(biāo)本 中p38MAPK的表達(dá)變化，并通過圖象分析技術(shù)對(duì)免疫組織化學(xué) 結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 通過以上研究，我們得出了以下結(jié)果 門）通過免疫印跡雜交發(fā)現(xiàn)，p38 MAPK在 2～7周齡小鼠 睪丸中均有表達(dá)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在2周齡小鼠睪丸生 精小管上皮中即可觀察到 p3 8 MAPK免疫反應(yīng)陽性表達(dá)，免疫反 應(yīng)陽性細(xì)胞為精原細(xì)胞；3、4、5 周齡小鼠睪丸僅有個(gè)別生精小 管上皮可見p38 MAPK兔疫陽性反應(yīng)；6、7周齡小鼠摹丸中p38 MAPK表達(dá)較豐富，免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞為精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì) 胞，兔疫反應(yīng)陽性物質(zhì)均主要位于細(xì)胞核內(nèi)。在7周齡小鼠睪丸 中還可見到部分間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)亦呈 p3 8 MAPK陽性。 （）隱睪術(shù)后 5天，隱睪側(cè) p3 SMAPK的表達(dá)與對(duì)照側(cè)相比 無顯著差別；自術(shù)后10天起，隱睪側(cè)生精小管的形態(tài)出現(xiàn)不同程 度的破壞，p38MAPK的表達(dá)也較對(duì)照側(cè)顯著下降。圖象分析的 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，p3 SMAPK的表達(dá)隨術(shù)后時(shí)間的推移逐漸減少。 這些結(jié)果提示，p3 8 MAPK可能在促進(jìn)和維持摹丸組織的發(fā) 育成熟以及精子發(fā)生過程中具有重要的作用。P38 MAPK是一種 2 一 重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，可將細(xì)胞外的刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，促 使調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等過程的特定基因表達(dá)，從而使相應(yīng)細(xì)胞 發(fā)生增殖、分化，因此它在細(xì)胞分裂、增殖過程中具有重要的調(diào) 控作用。p3 8 MAPK在小鼠睪丸不同發(fā)育階段及實(shí)驗(yàn)性隱睪中的 表達(dá)定位以及變化提示，該MAPK亞族可能對(duì)哺乳動(dòng)物生精細(xì)胞 的增殖分化具有調(diào)控作用，并可能參與了生精細(xì)胞凋亡過程的調(diào) 節(jié)。這為進(jìn)一步從分子水平探討 p3 8 MAPK對(duì)精于發(fā)生和睪丸功 能的調(diào)節(jié)機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，對(duì)于全面認(rèn)識(shí) p3 8 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通 路對(duì)生殖調(diào)控的作用機(jī)理也具有重要的意義。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R33;R697.2
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本文編號(hào)：2853055