目的:探討小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)條件培養(yǎng)基(CM)對同源間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)體外成管能力及向內(nèi)皮細胞(endothelial cells,ECs)分化的影響。方法:1.取5周齡左右的C57B/L6小鼠,獲取骨髓細胞,利用全骨髓貼壁法和差速貼壁法分別獲取MSCs和EPCs;2.使用流式細胞術分別檢測MSCs和EPCs表面標記物的表達;3.通過雙熒光染色和體外成管實驗對EPCs進行功能鑒定;4.對實驗進行分組:0%EPCs-CM組(對照組,采用全LG-DMEM培養(yǎng))?25%EPCs-CM組(采用25%EPCs-CM+75%LG-DMEM培養(yǎng))和50%EPCs-CM組(采用50%EPCs-CM+50%LG-DMEM培養(yǎng)),分別在培養(yǎng)1周、2周、3周時采用實時定量PCR(qRT-PCR)檢測上述各組MSCs CD31?vWF?eNOS的mRNA表達情況;5.根據(jù)qRT-PCR結(jié)果,對實驗再次分組,以50%EPCs-CM組為實驗組與0%EPCs-CM組為對照組,利用免疫熒光檢測各組MSCs CD31、CD34的表達情況;體外成管實驗檢測各組細胞的體外成管能力;使用NO試劑盒對各組上清液中的NO含量進行檢測。結(jié)果:1.流式細胞術結(jié)果顯示,第3代MSCs的Sca-1陽性表達率為93%,CD34和CD11b的陽性表達率分別為18.2%和31.9%;EPCs CD34、CD133和VEGFR2的陽性表達率分別為91.8%、67.4%和98.9%。2.EPCs可吞噬Dil標記的乙�；兔芏戎鞍�(Dil-AC-LDL),使細胞呈紅色熒光,并可以結(jié)合凝集素(UEA-1)而使細胞呈綠色。在基質(zhì)膠上可形成管腔樣結(jié)構(gòu)。3.qRT-PCR顯示3周時25%EPCs-CM濃度組CD31、vWF、eNOS mRNA的表達(1.45±0.81;1.47±0.92;3.79±0.85),vWF、eNOS mRNA的表達水平均較對照組升高顯著,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);50%EPCs-CM濃度組CD31、vWF、eNOS mRNA的表達(2.28±0.25,1.76±0.71,8.27±1.65),均較對照組顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.免疫熒光結(jié)果顯示實驗組MSCs表面CD31和CD34的表達明顯高于對照組;實驗組細胞成管能力明顯強于對照組;對照組細胞培養(yǎng)上清液中NO的含量為(8.81±3.41)μmol/L,實驗組細胞培養(yǎng)上清液中NO的含量為(20.93±9.47)μmol/L,較對照組明顯升高,差異顯著(P0.05)。結(jié)論:1.EPCs條件培養(yǎng)基能提高MSCs體外成管能力;2.EPCs條件培養(yǎng)基可促進MSCs體外向內(nèi)皮細胞(ECs)分化。
【學位單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R54
【部分圖文】：

：MSCs 原代第 48h，多邊形細胞為主；B：MSCs 第 3 代第 2 天，細胞呈細長梭形細胞為主；C：EPCs 原代第 7 天，長梭形細胞為主；D：EPCs 第 3 代第 3 天，細胞呈“鋪路石”狀。圖 1 倒置光學顯微鏡下細胞形態(tài)學的變化(100×)Figure 1 Morphological characteristics of MSCs and EPCs (100×)

A：VEGFR2； B：CD34： C：CD133； D：CD11b； E：CD34； F：Sca-1圖2 EPCs 和MSCs的表面標記物陽性率流式檢測結(jié)果Figure 2 Cellular surface antigens on EPCs and MSCs detected by FCM1.5 雙熒光染色鑒定 EPCs

A:Dil-AC-LDL; B: FITC-UEA-1; C:DAPI; D:Merge圖 3 EPCs 的雙標記染色Figure 3 Double marker staining of EPCs
【參考文獻】

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3 馮文磊;張猛;徐芳潔;印雙紅;王艷杰;陳雪玲;吳向未;;內(nèi)皮祖細胞條件培養(yǎng)基對間充質(zhì)干細胞增殖和成骨分化的影響及其機制[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2015年02期

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本文編號：2851275