酸堿平衡是人體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個重要因素。正常細胞外 液pH值（pH_o）為7.35-7.45。在一些病理或生理條件下，如組織缺 氧、酸中毒或堿中毒等，pH_o可在6.5～8.1之間波動，并由此引發(fā)血 管張力的改變。pH_o引起的血管張力改變，在不同組織，不同血管節(jié) 段的表現(xiàn)也不同，如在肺動脈，pH_o降低使之收縮，而在腦血管中， pH_o的降低則導(dǎo)致血管的舒張，其機制還未完全明了。有人認為pH_o是 通過改變內(nèi)皮源性血管活性物質(zhì)的釋放而影響血管的舒縮狀態(tài)的；也 有人認為pH_o是通過細胞內(nèi)pH值（pH_i）影響細胞代謝及信號傳遞途 徑從而改變血管平滑肌細胞張力的；還有實驗表明pH_o可以直接作用 于血管平滑肌細胞，改變其舒縮狀態(tài)從而調(diào)節(jié)血管張力，這種作用與 血管平滑肌細胞上鉀通道的功能狀態(tài)有密切的關(guān)系。目前對pH_o影響 肺、腦及腸系膜等阻力血管張力的研究較多，pH_o調(diào)節(jié)大血管張力的 機制，尤其是離子機制還不明了。 為了進一步探究pH_o調(diào)節(jié)血管張力的離子機制，本實驗以主動脈 平滑肌細胞為實驗對象，采用細胞培養(yǎng)及全細胞膜片鉗技術(shù)，研究pH_o 的改變對主動脈平滑肌細胞上鉀通道活動的影響。本實驗是國家自然 科學(xué)基金《流量依賴性血管張力調(diào)節(jié)的離子機制研究》（39800226） 中的一部分，為進一步通過細胞共培養(yǎng)技術(shù)研究pH_o調(diào)節(jié)血管張力的 機制奠定了基礎(chǔ)。 實驗方法 1、采用組織塊法培養(yǎng)SD大鼠乳鼠的主動脈平滑肌細胞，通過 免疫組織化學(xué)方法進行鑒定。此外，應(yīng)用消化法培養(yǎng)了小牛主動脈、 肺動脈的內(nèi)皮細胞和乳鼠腦微血管內(nèi)皮細胞。為下一步研究血管異質(zhì) 性對pH_o引起血管張力改變的影響作好準備。 2、采用全細胞膜片鉗技術(shù)檢測SD大鼠乳鼠主動脈平滑肌細胞 第四軍醫(yī)大學(xué)航空臨床醫(yī)學(xué)教研室 碩士學(xué)位論文 的膜電位及鉀通道的活動情況，鉗制電壓660mV，階越電壓為 10mV， 共 13個刺激電壓，刺激電壓從660mV～＋60mV。并應(yīng)用鉀通道特異 性阻斷劑（如 TEA、4AP等）確定鉀通道的類型。采用全細胞膜片 鉗技術(shù)記錄視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞株RF歷A的膜電位及進行膜上電 流觀察。 3、采用全細胞膜片鉗技術(shù)研究p民的急、慢性改變對乳鼠主動 脈平滑肌細胞上鉀通道功能狀態(tài)的影響。（）急性pH。改變：使細胞 順次暴露于pH7．2－pH6．5一pH7．2的細胞外液中，或是pH7．2～pHS．1 一PH7．2的細胞外液中。（2）慢性PHo改變：將細胞原代培養(yǎng)于CO。 濃度為8．8％的孵箱中，第7天進行傳代，取第8天（傳代后第2夭） 的細胞，進行膜片鉗實驗。在另一些實驗中，細胞外液中包含TEA 門）或4APu L 觀察對電流改變的影響，從而確定所涉 及的通道類型。 實驗結(jié)果 1、成功培養(yǎng)并鑒定了乳鼠主動脈平滑肌細胞、小牛主、肺動脈 內(nèi)皮細胞及乳鼠腦微血管內(nèi)皮細胞。 2、用全細胞膜片鉗記錄的電流鉗制方式測得SD大鼠7日齡乳鼠 主動脈平滑肌細胞的靜息膜電位為上7土smV（n＝30人 觀察到SMC 上主要存在的鉀通道電流為 K山，對 TEA門）敏感，對 4－APu） 不敏感。ACh對該通道電流無明顯作用。RF／6A細胞膜電位有兩個高 峰，峰值約為毛5mV和巧5mV。膜上存在三種鉀通道電流：鈣激活性 鉀通道（Ko＼瞬時外向性鉀通道（K／及內(nèi)向整流性鉀通道（K；＊。 3、在急性PH。改變中，PHo減低使主動脈平滑肌細胞膜超極化， 鉀電流增大。而升高則使膜去極化，鉀電流減小。TEA門）能 夠阻斷這種改變，而4AP（smM）對此沒有影響。在慢性實驗中， 孵箱中CO。濃度升高使膜去極化，鉀電流減小。 結(jié)論 實驗觀察到SD大鼠乳鼠主動脈平滑肌細胞上主要存在的鉀通道 ．3． 第四軍醫(yī)大學(xué)航空臨床醫(yī)學(xué)教研室 碩士學(xué)位論文 為K門通道，在個別細胞上見到Kv通道。這可能與物種及年齡有關(guān)， 也是血管異質(zhì)性在離子水平上的表現(xiàn)。pH。改變引起鉀電流及膜電位 的變化，提示p民影響血管張力的機制之一是通過改變其平滑肌細胞 上鉀通道活動來實現(xiàn)的。而急、慢性pH。降低對鉀電流的作用相反， 可能是因為pH；的介入改變了細胞的代謝狀態(tài)，或是細胞的一種適應(yīng) 性反應(yīng)。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R329.2
【文章目錄】：
縮略語
中文摘要
英文摘要
第一部分： 不同血管內(nèi)皮細胞（VEC）和血管平滑肌細胞（VSMC）的培養(yǎng)及鑒定
    一. 實驗材料
    二. 實驗方法
    三. 實驗結(jié)果
    四. 討論
第二部分： 培養(yǎng)主動脈平滑肌細胞及視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞鉀通道的研究
    一. 實驗材料
    二. 實驗方法
    三. 實驗結(jié)果
    四. 討論
第三部分： 急、慢性pHo改變對主動脈平滑肌細胞的電生理影響
    一. 實驗材料
    二. 實驗方法
    三. 實驗結(jié)果
    四. 討論
圖片資料
小結(jié)
文獻回顧
參考文獻
致謝

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孫巖,王磊一,劉志向,趙愛平,柴象樞;硒引起冠狀動脈平滑肌的舒張和細胞膜電位的降低[J];生理學(xué)報;1993年06期

本文編號：2850462