目的：應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法，觀察同型半胱氨酸(Hcy)誘導(dǎo)血管平滑肌 細(xì)胞(VSMC)增殖時VSMC內(nèi)蛋白質(zhì)的變化，以期為Hcy誘導(dǎo)VSMC增殖機 制的探討提供新的啟示。方法：以Hcy誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的VSMC增殖，流式細(xì) 胞術(shù)和MTT法觀察Hcy對VSMC增殖的影響，建立Hcy誘導(dǎo)大鼠VSMC增 殖的模型。采用二維凝膠電泳(2-DE)技術(shù)，分離VSMC全細(xì)胞蛋白，建立 Hcy誘導(dǎo)增殖的VSMC和正常VSMC蛋白質(zhì)2-DE表達(dá)圖譜，ImageMaster2D Elite分析確認(rèn)差異表達(dá)的蛋白；對差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；得到 的肽質(zhì)量指紋圖譜，NCBInr數(shù)據(jù)庫查詢加以確認(rèn)；并對差異表達(dá)的醛糖還原 酶和丙酮酸激酶進(jìn)行生物學(xué)功能確認(rèn)。結(jié)果：Hey能誘導(dǎo)VSMC細(xì)胞顯著增 殖，誘導(dǎo)作用呈現(xiàn)時間和劑量的依賴關(guān)系。VSMC蛋白2-DE圖譜可獲得蛋白 斑點1019±52個。平行圖譜配比率達(dá)到84． 29％。比較正常VSMC與Hcy誘 導(dǎo)后VSMC蛋白質(zhì)2-DE圖譜，發(fā)現(xiàn)了11個蛋白點發(fā)生明顯而穩(wěn)定的改變， 其中3個在Hcy誘導(dǎo)的VSMC表達(dá)明顯降低，8個明顯升高；質(zhì)譜鑒定后，9 個蛋白得到確認(rèn)，這些蛋白分別為：核纖層蛋白C、波形蛋白，LIM和SH3 蛋白1、 Wdr1類似蛋白、醛糖還原酶、丙酮酸激酶M2、 磷酸丙糖異構(gòu)酶和肌 鈣網(wǎng)蛋白，其中兩個蛋白同為波形蛋白。Hcy誘導(dǎo)增殖的VSMC中醛糖還原 酶和丙酮酸激酶的活性增加，其活性變化與其在2-DE圖譜上表達(dá)量的變化一 致，結(jié)論：在Hcy誘導(dǎo)VSMC增殖的過程中，糖代謝蛋白，細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白，肌 鈣網(wǎng)蛋白等蛋白表達(dá)量的變化，為探索Hcy誘導(dǎo)VSMC增殖機制提供了新的 啟示。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R341
【文章目錄】：
縮略詞對照表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 同型半胱氨酸誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖模型的建立
    1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
    3 小結(jié)
第二部分 血管平滑肌細(xì)胞蛋白質(zhì)2-DE圖譜的制備
    1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
    3 小結(jié)
第三部分 HCY誘導(dǎo)增殖的VSMC 2-DE差異譜圖的制備和分
    1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
    3 小結(jié)
第四部分 差異蛋白質(zhì)的鑒定和部分差異蛋白的確認(rèn)
    1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    2 實驗結(jié)果
    小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述

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本文編號：2843600