目的 從人絨毛膜組織中克隆人絨毛膜促性腺激素α亞基(HCGα)cDNA，構(gòu)建表達(dá)載體并進(jìn)行了表達(dá)、純化，為進(jìn)一步研究HCGα在多種腫瘤及異常妊娠中的作用及為后續(xù)以噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)生產(chǎn)HCGα單克隆抗體作前期準(zhǔn)備。 方法 提取新鮮人絨毛膜組織總RNA，利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出HCGα cDNA，克隆于表達(dá)載體PGEX4T-1，酶切鑒定后測(cè)序，測(cè)序證實(shí)序列正確，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白GST-HCGα，并通過(guò)改變培養(yǎng)條件誘導(dǎo)表達(dá)蛋白改變表達(dá)形式。超聲破菌后上清經(jīng)谷胱甘肽Sepharose 4B親和層析純化，沉淀包涵體經(jīng)變性、透析復(fù)性等處理，用SDS-PAGE電泳、Western印跡分析產(chǎn)物。 結(jié)果 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示NT-PCR擴(kuò)增片段大小約280bp，同預(yù)期片段相符。SDS-PAGE電泳顯示誘導(dǎo)表達(dá)的產(chǎn)物經(jīng)初步處理后有36KD左右一條明顯新增條帶，與預(yù)期分子量相符，Western印跡證實(shí)此結(jié)果。融合蛋白主要以包涵體形式存在，通過(guò)改變培養(yǎng)條件減少融合蛋白包涵體的形成。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)成功地從人絨毛膜組織中克隆出HCGαcDNA，克隆基因在大腸桿菌中獲得了較高水平的表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物有較好的免疫特異 人絨毛膜促性腺激素a亞基cDNA克隆、表達(dá)及純化中文摘要 ，勝。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
引言
第一部分 HCGαcDNA的克隆及鑒定
第二部分 HCGαcDNA的表達(dá)及純化
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間出版或公開(kāi)發(fā)表的論著、論文
附錄1: 實(shí)驗(yàn)流程圖
附錄2: 綜述
致謝

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本文編號(hào)：2843361