神經(jīng)膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)除神經(jīng)元外的另一類細胞，其中星形膠質(zhì)細胞以其數(shù)量、分布、形態(tài)學和功能等方面的優(yōu)勢占有特別重要的地位。研究表明：星形膠質(zhì)細胞不僅具有營養(yǎng)和保護神經(jīng)元的作用，而且參與神經(jīng)系統(tǒng)的其他功能及腦的高級功能活動。 根據(jù)星形膠質(zhì)細胞發(fā)生分化的“雙譜系學說(T1A譜系和O-2A譜系)”，可將星形膠質(zhì)細胞分為1型星形膠質(zhì)細胞(type-1 astrocyte，T1A)和2型星形膠質(zhì)細胞(type-2 astrocyte，T2A)兩型。兩型星形膠質(zhì)細胞分別由兩種不同抗原表達的祖細胞發(fā)育分化而來：T1A起源于抗原表型為Ran-2~+，A2B5~-的T1A前體細胞；T2A和少突膠質(zhì)細胞(oligodendrocyte，OL)起源于抗原表型為Ran-2~-，A2B5~+的雙潛能細胞—O-2A祖細胞(oligodendrocyte-type 2 astrocyte progenitor cells)。 目的 建立適合本實驗室條件的分離純化O-2A譜系細胞的方法，探討O-2A祖細胞的體外分化規(guī)律，并從蛋白質(zhì)水平揭示細胞骨架蛋白vimentin(波形蛋白)和鈣結合蛋白S-100β在T1A和T2A分化過程中的表達差異，為雙譜系細胞的后續(xù)研究奠定基礎。 方法 根據(jù)T1A、O-2A祖細胞的生長時間差異及細胞的粘附特性不同，采用振蕩法和差速貼壁法，并結合使用生長因子(PDGF，bFGF)，分離純化O-2A祖細胞，用MTT法檢測其細胞活性；觀察O-2A祖細胞在有血清和無血清培養(yǎng)條件下的分化情況；用免疫細胞化學方法，觀察vimentin和S-100β在T1A、T2A的表達情況。 結果 (1)純化的O-2A祖細胞胞體呈橢圓形，具有典型的雙極突起；經(jīng)免疫細胞化學染色鑒定，A2B5抗體標記陽性，細胞純度達95％；(2)應用20％胎牛血清(FCS)誘導O-2A祖細胞定向分化為T2A，應用無血清的化學條件培養(yǎng)基誘導其定 O.ZA祖細胞分化和兩型星形膠質(zhì)細胞抗原表達差異的研究 中文摘要 向分化為OL;(3)TIA、O一ZA祖細胞均表達vimeniin和S一IOOD，未成熟TZA不表 達vimeniin，但表達S一1 00日，成熟TZA均不表達vimentin和S一1 00p。 結論(l)采用振蕩法和差速貼壁法，并結合使用生長因子，建立了分離純化 o一ZA譜系細胞的方法;(2)分離純化的。一ZA祖細胞具有雙潛能性，在體外不同培 養(yǎng)條件下，可以定向分化為成熟TZA和OL:(3) T IA和TZA形態(tài)不同，具有分化 抗原表達差異;(4)在星形膠質(zhì)細胞的發(fā)育過程中，vimentin和S一1 00p的表達可能 存在時間和譜系間的差異。
【學位單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2003
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

T1ACM組培養(yǎng)13d時，純化的0-2A祖細胞數(shù)目增多(標尺=SOum)

生長因子組培養(yǎng)13d時，O-2A祖細胞振蕩后培養(yǎng)第1天，可見克隆球(標尺=50um)

生長因子組培養(yǎng)14d時，O-2A祖細胞振蕩后培養(yǎng)第2天，可見克隆球體積增大，并見有0.2A祖細胞遷移出(箭頭，標尺=SOPm)

【共引文獻】

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本文編號：2834404