神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)除神經(jīng)元外的另一類(lèi)細(xì)胞，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞以其數(shù)量、分布、形態(tài)學(xué)和功能等方面的優(yōu)勢(shì)占有特別重要的地位。研究表明：星形膠質(zhì)細(xì)胞不僅具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)神經(jīng)元的作用，而且參與神經(jīng)系統(tǒng)的其他功能及腦的高級(jí)功能活動(dòng)。 根據(jù)星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生分化的“雙譜系學(xué)說(shuō)(T1A譜系和O-2A譜系)”，可將星形膠質(zhì)細(xì)胞分為1型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type-1 astrocyte，T1A)和2型星形膠質(zhì)細(xì)胞(type-2 astrocyte，T2A)兩型。兩型星形膠質(zhì)細(xì)胞分別由兩種不同抗原表達(dá)的祖細(xì)胞發(fā)育分化而來(lái)：T1A起源于抗原表型為Ran-2~+，A2B5~-的T1A前體細(xì)胞；T2A和少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte，OL)起源于抗原表型為Ran-2~-，A2B5~+的雙潛能細(xì)胞—O-2A祖細(xì)胞(oligodendrocyte-type 2 astrocyte progenitor cells)。 目的 建立適合本實(shí)驗(yàn)室條件的分離純化O-2A譜系細(xì)胞的方法，探討O-2A祖細(xì)胞的體外分化規(guī)律，并從蛋白質(zhì)水平揭示細(xì)胞骨架蛋白vimentin(波形蛋白)和鈣結(jié)合蛋白S-100β在T1A和T2A分化過(guò)程中的表達(dá)差異，為雙譜系細(xì)胞的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。 方法 根據(jù)T1A、O-2A祖細(xì)胞的生長(zhǎng)時(shí)間差異及細(xì)胞的粘附特性不同，采用振蕩法和差速貼壁法，并結(jié)合使用生長(zhǎng)因子(PDGF，bFGF)，分離純化O-2A祖細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)其細(xì)胞活性；觀察O-2A祖細(xì)胞在有血清和無(wú)血清培養(yǎng)條件下的分化情況；用免疫細(xì)胞化學(xué)方法，觀察vimentin和S-100β在T1A、T2A的表達(dá)情況。 結(jié)果 (1)純化的O-2A祖細(xì)胞胞體呈橢圓形，具有典型的雙極突起；經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，A2B5抗體標(biāo)記陽(yáng)性，細(xì)胞純度達(dá)95％；(2)應(yīng)用20％胎牛血清(FCS)誘導(dǎo)O-2A祖細(xì)胞定向分化為T(mén)2A，應(yīng)用無(wú)血清的化學(xué)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)其定 O.ZA祖細(xì)胞分化和兩型星形膠質(zhì)細(xì)胞抗原表達(dá)差異的研究 中文摘要 向分化為OL;(3)TIA、O一ZA祖細(xì)胞均表達(dá)vimeniin和S一IOOD，未成熟TZA不表 達(dá)vimeniin，但表達(dá)S一1 00日，成熟TZA均不表達(dá)vimentin和S一1 00p。 結(jié)論(l)采用振蕩法和差速貼壁法，并結(jié)合使用生長(zhǎng)因子，建立了分離純化 o一ZA譜系細(xì)胞的方法;(2)分離純化的。一ZA祖細(xì)胞具有雙潛能性，在體外不同培 養(yǎng)條件下，可以定向分化為成熟TZA和OL:(3) T IA和TZA形態(tài)不同，具有分化 抗原表達(dá)差異;(4)在星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中，vimentin和S一1 00p的表達(dá)可能 存在時(shí)間和譜系間的差異。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類(lèi)】：R329
【部分圖文】：

T1ACM組培養(yǎng)13d時(shí)，純化的0-2A祖細(xì)胞數(shù)目增多(標(biāo)尺=SOum)

生長(zhǎng)因子組培養(yǎng)13d時(shí)，O-2A祖細(xì)胞振蕩后培養(yǎng)第1天，可見(jiàn)克隆球(標(biāo)尺=50um)

生長(zhǎng)因子組培養(yǎng)14d時(shí)，O-2A祖細(xì)胞振蕩后培養(yǎng)第2天，可見(jiàn)克隆球體積增大，并見(jiàn)有0.2A祖細(xì)胞遷移出(箭頭，標(biāo)尺=SOPm)

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2834404