目的 肝臟是機(jī)體產(chǎn)熱的重要器官，參與體溫調(diào)節(jié)。近年來，肝臟在體溫調(diào)節(jié)方面的作用日益受到重視。但到目前為止，關(guān)于iNOS在肝臟的生理和病理狀態(tài)下所起的作用卻少有研究。因此，本實(shí)驗(yàn)從上述問題著手，基于NO廣泛的生理和病理作用，研究細(xì)菌脂多糖引起的內(nèi)毒素性發(fā)熱中，iNOS在大鼠肝臟中的表達(dá)，從而進(jìn)一步探討iNOS在體溫調(diào)節(jié)中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法 方法：(1)測量體溫：在實(shí)驗(yàn)前3天每天讓動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)3小時(shí)，大鼠放在特制的鼠籠內(nèi)，將測溫探頭插入大鼠直腸內(nèi)8cm，第4天進(jìn)行發(fā)熱實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室溫度控制在20-24℃。用無熱原生理鹽水將脂多糖稀釋成100μg／ml，實(shí)驗(yàn)時(shí)按1mg／kg劑量給大鼠腹腔注射。體溫測量時(shí)，將大鼠放在特制的鼠籠內(nèi)，將測溫探頭插入直腸內(nèi)8cm，并用膠布固定于尾根部，待體溫恒定后測三次體溫(每次間隔10min)以其均值作為基礎(chǔ)體溫。然后各組注射相應(yīng)藥物，以后每間隔1小時(shí)記錄一次體溫，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。為了避免生物節(jié)律的影響，每次實(shí)驗(yàn)均在上午8時(shí)30分開始，采用分批交叉進(jìn)行各組實(shí)驗(yàn)。(2)免疫組織化學(xué)技術(shù)：將大鼠用20％氨基甲酸已酯5ml／kg腹腔注射麻醉，灌流固定，取肝組織迅速置于含4％多聚甲醛的PBS液(0.01mol／L，Ph7.4)，固定6小時(shí)，再移入15％的蔗糖磷酸緩沖液中4℃過夜，準(zhǔn)備切片。次日將標(biāo)本用OCT包埋，恒冷切片機(jī)溫度調(diào)到-20℃，行10μm冰凍切片。 用3％H。O。室溫下處理切片10min；用5％正常羊血清室溫下處理 3o而n；在每張切片上滴加50…一抗PB液（效價(jià)1：ppL4℃下 過夜。次日，每張切片依次滴加生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG（效價(jià) 1 ：10o乃7℃30ruin；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素37℃30dn。然后 將新鮮配制的DAB顯色劑滴于標(biāo)本上，顯色10min，充分水洗后， 蘇木素復(fù)染。常規(guī)剃度脫水，樹膠封片。使用顯微圖象分析技術(shù)， 測定iNOS陽性反應(yīng)產(chǎn)物的整合光密度值、％陽性面積、平均灰度 值。所有數(shù)據(jù)以均值。標(biāo)準(zhǔn)差k土S）表示，統(tǒng)計(jì)分析使用多樣本 均數(shù)方差分析進(jìn)行顯著性差異的比較。 結(jié) 果 LPS發(fā)熱組在腹腔注射LPS后體溫逐漸的升高，在注射后6 小時(shí)達(dá)到最高值，體溫升高1．38℃，明顯高于對(duì)照組u＜o(jì)．01廠 而后逐漸下降，在注射LPS后9小時(shí)大鼠的體溫仍高于對(duì)照組P ＜o(jì)．01人口s發(fā)熱組在升高體溫的同時(shí)，也有效的增高肝臟內(nèi) mOS活性，與對(duì)照組比較，差異非常顯著河＜O．＊1人切片經(jīng)免 疫組織化學(xué)反應(yīng)oAB染色后，可在光鏡下觀察到iNOS陽性產(chǎn)物 呈棕褐色，主要分布在枯否細(xì)胞、膽管內(nèi)皮細(xì)胞、噬酸粒細(xì)胞等細(xì) 胞的胞漿中，在肝細(xì)胞膜上也可見iNOS陽性產(chǎn)物。采用顯微圖 象分析系統(tǒng)測定iNOS陽性產(chǎn)物的整合光密度值、平均灰度值、％ 陽性面積。其中 LPS發(fā)熱組3，6，gb iNOS陽性產(chǎn)物的整合光密度 值與％陽性面積均高于正常對(duì)照組iNOS的整合光密度值和％陽 性面積（P＜o(jì)．0門，且以LPS發(fā)熱組6h的整合光密度值及防陽性 面積為最大。平均灰度值則相反，LPS發(fā)熱組3，6，gb的平均灰度 值較對(duì)照組比較均有減少汗＜O對(duì)門，以LPS發(fā)熱組6h的值為最 小。將LPS發(fā)熱組的體溫變化與肝臟組織中iNOS活性變化做相 關(guān)分析，結(jié)果表明二者之間存在正相關(guān)關(guān)系p＜o(jì)．01人 ·2· 結(jié) 論 1．LPS誘導(dǎo)肝臟組織廣泛iNOS陽性反應(yīng)產(chǎn)物，并在大鼠注 射LPS后6小時(shí)iNOS陽性反應(yīng)產(chǎn)物最多。 TiNOS在肝細(xì)胞陽性反應(yīng)產(chǎn)物主要分布在肝細(xì)胞膜。 3．LPS誘導(dǎo)的體溫升高和肝臟中iNOS活性增高存在正相關(guān) 關(guān)系，肝臟內(nèi)iNOS參與體溫調(diào)節(jié)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R392.1
【部分圖文】：

后不陽整比

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 胡敏;一氧化氮的病理及生理作用[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1995年02期

本文編號(hào)：2824310