背景和目的 臨床上的重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)屬病理分型的急性出血壞死型胰腺炎(acute hemorrhagic and necrotizing pancreatitis，AHNP)。本病起病急，病情兇險(xiǎn)，病理上以廣泛的胰腺壞死和出血為特征，其臨床預(yù)后差，常合并胰外多器官損害或功能障礙，或出現(xiàn)胰腺局部膿腫、假性囊腫。在以往研究中，建立SAP動(dòng)物模型，通常采用胰管結(jié)扎、胰管內(nèi)或胰腺被膜下注射�；悄懰徕c等方法。然而，上述方法均屬創(chuàng)傷性，且手術(shù)有一定難度，動(dòng)物死亡率高。Lampel等首次報(bào)導(dǎo)應(yīng)用雨蛙素建立非創(chuàng)傷性急性胰腺炎水腫型(acute pancreatitis，AP)大鼠模型。此后，雨蛙素致AP動(dòng)物模型廣泛應(yīng)用于胰腺炎的實(shí)驗(yàn)研究。然而，該模型的病理特征僅為輕型AP，不能形成SAP。本實(shí)驗(yàn)采用雨蛙素(Caerulein，Cn)聯(lián)合脂多糖(Lipopolysacchride，LPS)腹腔內(nèi)注射，建立一種非創(chuàng)傷性的小鼠SAP模型。材料和方法 1．動(dòng)物和分組：NIH小鼠32只，雌性，體重25.0±3.0g，隨機(jī)分為4組：Cn+LPS組、Cn組、LPS組和生理鹽水(NS)組，每組8只。2．模型制作：受試動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前禁食18小時(shí)，自由飲水。Cn+LPS組：雨蛙素50μg/kg·h×6，在末次雨蛙素注射后，即向腹腔內(nèi)注射脂多糖10mg/kg；Cn組雨蛙素50μg/kg·h×6；LPS組生理鹽水50ml/kg·h×6，在末次生理鹽水注射后，即向腹腔內(nèi)注射脂多糖1Omg/kg；NS組生理鹽水50ml/kg．h×6。3．血清學(xué)檢查：藥物注射完畢后3小時(shí)采血，取血清，用碘一淀粉比色法測(cè)定淀粉酶含量，用硝酸還原酶法測(cè)定NO濃度。4．取材：采血后處死小鼠，取胰腺稱濕重。分別取胰組織置4℃2.5％戊二醛溶液和10％甲醛溶液固定，部分胰組織置-70℃冰箱保存，備用待測(cè)。取胰外器官包括胃、回腸末端、肝、腎、脾、心、肺，置入10％甲醛溶液固定。5．胰腺組織SOD和MDA檢測(cè)：制備10％胰腺組織勻漿，雙縮脲 浙江人學(xué)傾】：學(xué)位論義 法測(cè)蛋白定量，黃噪吟氧化酶法測(cè) SOD，硫代巴比妥酸（TBA）法測(cè) MDA。6．光鏡標(biāo)本制 樣觀察：組織經(jīng)ICh甲醛固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)蘇木素和伊紅染色，光鏡觀察。 7．透射電鏡標(biāo)本制樣觀察：把胰腺組織修剪成 lmm’大小的組織塊，2．5％戊l醛b！l％ 餓酸雙閑定，2％醋酸鈾塊染，梯度乙醇和丙酮脫水，Epon 812包埋，超薄切片，醋酸 鈉和拘橡酸鉛雙重染色，PhilipS TECNAI 10透射電鏡觀察，加速電壓80 KV。8．胰腺 組織病理學(xué)評(píng)分：用雙盲法按S。hmidt’s標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。9．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：兩樣本均數(shù)差異 山t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)川IISD表示；分值等級(jí)差異川Afdlt分析，數(shù)據(jù)川樣本例數(shù)表示。 結(jié)果1．小鼠胰腺和胰外紐織人體觀察：Cn＋LPS組：小鼠腹腔有腹水利少量皂化斑； 胰腺腫脹，可見(jiàn)多處皂化斑點(diǎn)羽；少植出血點(diǎn)；胰外器官多處改變，肖腸擴(kuò)張，腸腔積氣 積液，有小腸套迭，脾色暗紅，體積增人廠腎包膜卜偶可見(jiàn)出血斑點(diǎn)；肝色變暗，略顯 腫脹。Cn i胰腺水腫。LPS i和 NS i均無(wú)異常改變；2．胰腺組織病理變化和病理學(xué)評(píng) 分：Cn＋LPS組：胰腺山現(xiàn)嚴(yán)重的水腫、壞死和炎癥浸潤(rùn)，并出現(xiàn)不同程度的出血。Cn 組：胰腺出現(xiàn)顯義的間質(zhì)水腫和輕中度的炎癥浸潤(rùn)，但沒(méi)有明顯的實(shí)質(zhì)壞死利出血。LPS 紐：胰腺輕微水腫，有炎癥浸潤(rùn)，無(wú)出血壞死。NS組止常。3．胰腺腺泡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變 化：Cn＋LPS組擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成同心性膜性小體（COflC6ntriCme。bf。lOUS bodleS）， 線粒體主泡化，酶原顆粒明顯減少，胞質(zhì)山人量空泡形成。Cn組粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕微擴(kuò)張， 線粒體輕度腫脹，酶原顆粒減少，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少撾囪噬性空泡。LPS組胞質(zhì)山有少量主 泡出現(xiàn)。NS組止常。4．胰外重要器官病理變化：Cn＋LPS組出現(xiàn)多器宮損害。Cn釩：各 器官組織均止常。LPS組：心、肺、腎、肝等器官內(nèi)可見(jiàn)少量炎癥浸潤(rùn)。NS組：止常。 5．胰腺濕巫測(cè)定：Cn＋LPS組胰腺濕重升高明顯，與對(duì)照組和 LPS組比較，結(jié)果有差異 （P＜0．of和 P＜0．05）。Cn＋LPS組和 Cn組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6．血淀粉酶檢 查：Cn＋LPS組血淀粉酶值升高達(dá)對(duì)照組的 5倍以上，與對(duì)照紐和 LPS組比較，均有顯 3 浙江人學(xué)邱上學(xué)位論義 義性差異（P＜0．of）。Cn＋LPS組與Cn組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。7．血消NO濃度： Cn＋LPS組的血淌NO濃度明顯升高，與其他三組比較，均有顯著性差異（P＜0．of）。Cn 紐血消NO濃度正常。LPS組血清NO濃度增高明顯，與對(duì)照組比較，有顯著性差異 （P＜0
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳承堂,黎沾良,熊德鑫,祝小楓;清胰湯治療犬急性壞死性胰腺炎機(jī)理探討[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1998年02期

2 任茂才,宋林學(xué),洪明,仝蜀生,張?jiān)?潘金國(guó),劉蜀,陳波,段世剛;中西醫(yī)結(jié)合治療重癥急性胰腺炎(附30例報(bào)告)[J];肝膽胰外科雜志;2000年02期

3 嚴(yán)燕國(guó),艾中立,劉志蘇,徐睿;當(dāng)歸注射液對(duì)重癥急性胰腺炎胰腎損害的保護(hù)作用[J];肝膽胰外科雜志;2000年02期

4 姜永鋒;急性胰腺炎的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展(綜述)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);1996年01期

5 喬安意,張肇達(dá),劉續(xù)寶,蔣俊明;中藥TCM-X對(duì)急性胰腺炎大鼠細(xì)菌移位的影響[J];華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

6 王自法,潘承恩,劉紹誥;急性胰腺炎中炎癥介質(zhì)的作用[J];華人消化雜志;1998年02期

7 朱鐵明,彭承宏,周君富,陳作冰,陳鐵炯,陳剛;SIRS病人血漿自由基反應(yīng)及其臨床意義[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2000年12期

8 陳琪,趙連根,陳玉玲;清胰湯Ⅰ號(hào)主要藥味對(duì)胰蛋白酶活性的抑制作用(體外試驗(yàn))[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;1998年05期

9 李革,申容碩,姜惟龍;實(shí)驗(yàn)性胰腺炎大鼠血漿ET和PGI_2水平的改變及川芎嗪治療的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2000年03期

10 陳海平,李鋼,鄭挧淵;中藥合劑AA-3抑制實(shí)驗(yàn)性急性胰腺炎大鼠炎性介質(zhì)的研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2000年05期

本文編號(hào)：2823099