結核桿菌耐藥性菌株的出現(xiàn)與蔓延是導致結核病日趨嚴重的重要原因之一，其中以結核桿菌耐利福平菌株的影響尤為突出。據(jù)報道，大于96％的結核桿菌耐利福平臨床分離株的rpoB基因都發(fā)生了突變。在過去的十幾年中，先后出現(xiàn)了很多用于耐利福平結核桿菌rpoB基因突變的檢測方法，但大多在不同程度都存在局限性。 本研究中，熒光微球技術被引入結核桿菌耐利福平分離株的檢測，目的在于建立一種耐利福平rpoB基因突變的多重檢測方法，具體的研究工作分為三個方面： 1．結核桿菌rpoB基因高頻突變區(qū)的PCR擴增； 2．針對結核桿菌rpoB基因531位和526位兩個突變頻率較高的位點設計出5條特異性探針，用熒光微球技術對結核桿菌耐利福平菌株rpoB基因的突變進行多重檢測； 3．熒光微球技術與利福平藥敏實驗、DNA測序法及PCR-SSCP法的對照分析。 研究結果表明，用分別偶聯(lián)了五條特異性探針的五組熒光微球對42株結核桿菌臨床分離株進行檢測，發(fā)現(xiàn)有十株結核桿菌的rpoB基因分別在531位和526位發(fā)生單堿基突變。這一結果分別與利福平藥敏實驗和DNA測序得到的結果相一致。PCR-SSCP法對照實驗結果顯示，有些結核桿菌耐利福平突變菌株未能檢出，由此進一步說明熒光微球技術具有更高的檢測靈敏度和準確性。此外，通過測序檢測到兩株耐利福平結核桿菌的rpoB基因分別在同一氨基酸密碼子中發(fā)生了雙堿基突變；還發(fā)現(xiàn)在兩株利福平敏感菌株的rpoB基因中也存在兩處以上的突變位點，并分別位于不同的氨基酸密碼子中，這可能是第二位點突變對菌株耐利福平突變產生抑制的結果。
【學位單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R346

【共引文獻】

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3 薛瑩;結核分枝桿菌Rpf樣蛋白生物學及免疫學活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

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3 楊柳;結核分枝桿菌多重耐藥基因快速檢測方法學的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

4 楊軍蘭;結核分枝桿菌16ku、38ku蛋白基因的克隆表達及其初步應用[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

5 王振軍;RAPD技術對結核分枝桿菌菌株鑒別及其耐藥相關性研究[D];青島大學;2005年

6 高曉鵬;結核分枝桿菌Rv1884c和Rv0867c基因的克隆表達及其促生長作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2007年

7 岳晨莉;藤黃微球菌Rpf結構域及其突變體基因的克隆、表達及生物活性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

8 楊明;原核表達的結核分枝桿菌H_（37）RV株重組ESAT-6和CFP-10蛋白的功能分析[D];吉林大學;2009年

本文編號：2819098