發(fā)布時(shí)間：2020-09-11 12:38

　　 平滑肌細(xì)胞收縮及其調(diào)節(jié)的分子機(jī)制長(zhǎng)期以來(lái)一直是平滑肌研究的熱點(diǎn)。傳統(tǒng)的肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase，MLCK)途徑仍被普遍認(rèn)可，但研究也表明細(xì)肌絲結(jié)合蛋白在其中起著重要的調(diào)節(jié)作用。肌鈣樣蛋白calponin(CaP)就是細(xì)肌絲結(jié)合蛋白家族中的一員。一般認(rèn)為，CaP通過(guò)與肌動(dòng)蛋白結(jié)合而對(duì)平滑肌細(xì)胞的收縮起抑制作用。但目前對(duì)于CaP調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞收縮的具體機(jī)制還無(wú)定論。 在本研究中我們發(fā)現(xiàn)L-MLCK N端的2Ig片段可以和CaP相結(jié)合。為了進(jìn)一步加以證實(shí)，我們表達(dá)并純化了L-MLCK氨基端2Ig區(qū)域帶His-tag標(biāo)記的重組蛋白(2Ig蛋白)，并用DEAE離子交換層析柱從肌絲中純化出了純度約為90％的CaP蛋白。再通過(guò)免疫共沉淀、overlap等方法證實(shí)了二者的相互結(jié)合。CaP與L-MLCK氨基端2Ig片段的結(jié)合也提示了CaP調(diào)節(jié)平滑肌收縮的新途徑，為進(jìn)一步研究其調(diào)節(jié)機(jī)制打下了基礎(chǔ)。 本研究中同時(shí)還進(jìn)行了有關(guān)血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制素(endostatin)的研究。Endostatin，尤其是原核表達(dá)的重組endostatin，由于復(fù)性及多聚體形成等因素的影響，其生物學(xué)活性一直很不穩(wěn)定，限制了在臨床應(yīng)用中的推廣。在實(shí)驗(yàn)中我們觀察到重組endostatin極易形成多聚體，且多聚體可能也具有抗血管生成的生物學(xué)活性。為此，我們?cè)隗w外表達(dá)并純化了重組人內(nèi)皮細(xì)胞抑制素(rhEndostatin)，并利用反向高效液相色譜(RP-HPLC)系統(tǒng)分離了rhEndostatin的單體和多聚體；分離所得的單體和多聚體分別用體內(nèi)雞胚尿囊膜(CAM)新生血管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)生物學(xué)活性，結(jié)果二者均可使CAM新生血管化率下降。在0.8μg量時(shí)單體和多聚體的抑制率分別為38％和58％，多聚體表現(xiàn)了比單體更強(qiáng)的抗血管生成能力(P＜0.05)；但當(dāng)用量小于0.4μg時(shí)，雖然單體和多聚體都有明顯的抗血管生成效應(yīng)，但二者之間并沒(méi)有顯著性差別(P＞0.05)。我們的研究表明endostatin多聚體的形成不會(huì)抑制它的抗血管生成活性，也提示了其構(gòu)象中二硫鍵的正確形成與否對(duì)其抗血管生成活性的影響不顯著。
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類(lèi)】：R341

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 林建韶;張建民;惠京;仇曉菲;;炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤及低度惡性肌纖維母細(xì)胞肉瘤[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2007年04期

2 于丹;騫愛(ài)榮;商澎;;H2-calponin在細(xì)胞力學(xué)信號(hào)感知中的作用[J];生命的化學(xué);2012年02期

3 ;Signal transduction in the gastrointestinal smooth muscle[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

4 李慧;調(diào)寧蛋白的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));2003年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 洪玉;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為光感受器樣細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 張健;Raf-1激酶對(duì)SAH后腦血管痙攣及早期腦損傷的作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2011年

3 朱雪瓊;子宮平滑肌腫瘤的鑒別診斷及雙向電泳分析[D];浙江大學(xué);2004年

4 徐以民;小鼠胚泡圍著床期LongSAGE文庫(kù)構(gòu)建及相關(guān)基因研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 姚興鳳;68例胃腸間質(zhì)瘤免疫組織化學(xué)研究[D];武漢大學(xué);2005年

2 張影;肌球蛋白Ca～（2+）與非Ca～（2+）調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2816687