前言 1981年P(guān)arkman發(fā)現(xiàn)CD43表達(dá)異常與X連鎖的隱性遺傳病——Wiskott-Ablrich密切相關(guān)。1990年Ardman等在HIV-1感染的患者體內(nèi)檢測到抗CD43的自身抗體引起了人們對CD43的進(jìn)一步關(guān)注。2000年文獻(xiàn)報道在HIV患者外周血T細(xì)胞表面CD43表達(dá)異常，電泳遷移率改變，并發(fā)現(xiàn)其在HIV特異反應(yīng)中起重要調(diào)節(jié)作用。 CD43抗原已經(jīng)被克隆，但它與其它已知的蛋白質(zhì)沒有同源性。CD43基因定位于16P11.2帶。最近的研究表明染色體16P12-11帶可以增強(qiáng)IgE變態(tài)反應(yīng)。而CD43基因編碼區(qū)定位于此區(qū)域。推測其可能在人類漿細(xì)胞、T、B細(xì)胞調(diào)節(jié)中起重要作用。由于在多種免疫缺陷病中發(fā)現(xiàn)了CD43的表達(dá)異常，因此CD43已被列為變態(tài)反應(yīng)的候選基因。 CD43(leukosialin)，又名涎福林(sialophorin)。是完整的細(xì)胞膜表面粘蛋白。表達(dá)于胚胎期的卵黃囊細(xì)胞、胎兒肝細(xì)胞、骨髓細(xì)胞。成年期表達(dá)于骨髓造血干細(xì)胞。除靜止B細(xì)胞以外的所有白細(xì)胞。CD43還表達(dá)于組織巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞。在淋巴瘤細(xì)胞、某些類型的白血病以及實體瘤細(xì)胞表面也有表達(dá)。鑒于CD43如此廣泛的分布，推測其在細(xì)胞之間相互作用，免疫調(diào)節(jié)中扮演重要的角色。但目前對CD43的研究尚未全面開展，有必要對其進(jìn)行深入研究。 實驗材料與方法 1．常規(guī)法分離外周血單個核細(xì)胞：無菌取血，肝素抗凝，淋巴細(xì)胞分離液分離。吸取界面單個核細(xì)胞。 2．培養(yǎng)細(xì)胞：10％FCS調(diào)整細(xì)胞為 IX”／Inl備用。實驗組 加PWM，對照組不加PWM。 3．熒光抗體標(biāo)記：每份細(xì)胞分為兩份，其中一份加人PE－ ＊D19和＊＊C－C＊＊，另一份加人1呂q－＊E和1＊；－N＊C。 4．7＊0檢測：OH oilest軟件獲取細(xì)胞，計數(shù)一萬個細(xì)胞，得 出CD43”CD19”＊）細(xì)胞占總CD19 ＊細(xì)胞的比例。 5．EllSA測定上清中IgG＊gM抗體的含量： 結(jié) 果 CN3”CD19”／CD19”B細(xì)胞tb率48 ／J’時實驗組與對jR組有 顯著差異，P＜O．00。24小時s6小時實驗組與對照組均無顯著 差異，P＞O．05。1M上68小時未加＊＊M對照組B細(xì)胞凋亡，達(dá)不 到流式要求濃度故未上機(jī)檢測．實驗組 CD43T”／CD19T細(xì) 胞比率 48小時與其它培養(yǎng)時段之間有顯著差異，P③．00，實驗 組的 小日、96小日、1糾小時、168小時之間無顯著差異。P＞O． 05。對照組各培養(yǎng)時段之間無顯著差異。 PwM誘導(dǎo)系統(tǒng)內(nèi)屹 J 的分泌量均顯著高于對照組。 I＞G＊＞M抗體分泌與 CD43表達(dá)之間無相關(guān)性�。�0．05人培養(yǎng) 48小時通過倒置顯微鏡照相觀察到抗CD43抗體可引起PBMC聚 集。 4．PWM＋抗 CD43抗體誘導(dǎo)系統(tǒng)內(nèi)屹M(fèi)＊ 分泌與 PWM誘 導(dǎo)系統(tǒng)內(nèi)抗體分泌無顯著差異，P＞0．05。 討 論 據(jù)報道用抗CD43的單克隆抗體證實不同分化階段的B細(xì)胞 可分為CD43T細(xì)胞或CD43＊細(xì)胞兩群。因此有人推斷CD43” B細(xì)胞如同CDS飛細(xì)胞一樣代表一個獨立的B細(xì)胞系。本實驗 表明 B細(xì)胞在PWM刺激下于培養(yǎng)第二天 CD43表達(dá)明顯增加，這 ·二· 一結(jié)果表明，CD43屬于在B細(xì)胞激活、分化時表達(dá)增加的膜分 子。從前的實驗用單標(biāo)測熒光強(qiáng)度變化證實這一觀點。本實驗首 次用流式雙標(biāo)記方法從測定CD43丫”細(xì)胞百分率變化的角度 同樣證實CD43飛細(xì)胞代表一個獨立的B細(xì)胞群的提議不成立。 為準(zhǔn)確測得B細(xì)胞表面CD43表達(dá)頻率，本實驗每份細(xì)胞均 分為兩份，每份標(biāo)本均設(shè)自身對照。可以將非特異染色降低到最 低限度。 M．Wiken等到報道用TPA或抗CD40單克隆抗體刺激外周血 B細(xì)胞（在自體T細(xì)胞和5％單核細(xì)胞存在下人用抗CD43抗體間 接標(biāo)記方法測得CD43”B細(xì)胞百分率為12％－80％。此百分率 由于用間標(biāo)方法測得，實質(zhì)上為所有培養(yǎng)細(xì)胞出細(xì)胞所有發(fā)育階 段，其中包括一部分T細(xì)胞和單核細(xì)胞兒D43”細(xì)胞的百分率。間 標(biāo)方法尤其不能回避培養(yǎng)時間過長，非特異染色過重的弊端。為 準(zhǔn)確反映B細(xì)胞各發(fā)育階段并與當(dāng)前流式診斷的方法接軌，本實 驗采用雙色熒光標(biāo)記測得CD43丫”細(xì)胞的百分率，用直標(biāo)方 法測得的CD43T細(xì)胞百分率數(shù)值相對于以往用間標(biāo)方法則測得 的整個B細(xì)胞發(fā)育階段的數(shù)值低。分析可能存在如下原因出細(xì) 胞進(jìn)入漿細(xì)胞階段將丟失大部分表面標(biāo)記（包括CD19人PWM 刺激B細(xì)胞最終分化為淋巴母細(xì)胞。漿細(xì)胞階段CD43”B細(xì)胞 百分率極高。而CD43丫D19“細(xì)胞將不能涵蓋CD43”漿細(xì)胞細(xì) 胞的百分率。PWM是T細(xì)胞依賴的B細(xì)胞激活劑，據(jù)細(xì)胞體外 活化分裂周期，靜止期的細(xì)胞在體外經(jīng)有絲分裂原的活化后，從 G。期進(jìn)人G；期，進(jìn)一步進(jìn)人S期經(jīng)歷了72小時，而后再分化成漿 母細(xì)胞進(jìn)而成為漿細(xì)胞分泌抗體，因此，本實驗證實PWM引起的 CD43表達(dá)增加發(fā)生于細(xì)胞的活化和增殖階段。 可以用于特異性鑒別漿細(xì)胞的表面標(biāo)志極少，BD2000年的流 式期刊推薦用熒光標(biāo)記的CD38和CD19單抗可準(zhǔn)確鑒別漿細(xì)胞。 CD38在漿細(xì)胞表面強(qiáng)烈表達(dá)，但CD38并非漿細(xì)胞特有的標(biāo)志， ·3· 它同時激活T細(xì)胞表面表達(dá)，但?
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2814731