【摘要】：炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)簡稱炭疽桿菌，是炭疽病的病原體。炭 疽桿菌形成芽孢的能力和強致病性使其成為最有效的生物戰(zhàn)劑之一。美國在“9． 11” 之后又發(fā)生了炭疽恐怖事件，使世界各國更加重視對炭疽桿菌的研究。 通過比較基因組學(xué)來研究微生物的致病機理，已成為微生物基因組學(xué)研究的重 要手段。消減抑制雜交(suppression substractive hybridization，SSH)技術(shù)是 比較基因組學(xué)的重要方法之一。SSH技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于許多原核生物，如結(jié)核 桿菌、幽門螺桿菌、泌尿道感染大腸桿菌、鉤端螺旋體不同株間，以及大腸桿菌與 鼠傷寒沙門氏菌、炭疽桿菌與蠟樣桿菌和蘇云金桿菌等不同菌種之間基因組的比較。 本研究選取炭疽桿菌強毒株A16與疫苗株A16R為研究對象。炭疽桿菌強毒株 A16是我國特有的菌種，減毒株A16R系1953年楊叔雅教授等人通過對A16的紫外 照射等處理后獲得的無莢膜水腫型人用疫苗株，是目前世界上投入使用的僅有兩株 人用疫苗株之一。 我們期望通過SSH技術(shù)，比較炭疽桿菌A16和A16R基因組間的差異，并對這些 差異片段進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討炭疽桿菌A16R減毒機制，進(jìn)而推斷炭疽桿菌的致病 機理。 本實驗以炭疽桿菌A16為tester，A16R為driver，進(jìn)行消減抑制雜交，得到 了炭疽桿菌A16與A16R消減PCR的混合物，與T載體相連接后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，構(gòu) 建了消減文庫。通過Southern blot的初步篩選和PCR復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)了9個只存在于 炭疽桿菌A16中的差異片段。對這9個差異片段進(jìn)行序列測定并與網(wǎng)上序列相比較， 比對結(jié)果顯示這9個片段均位于pX02質(zhì)粒上，驗證了A16R丟失了pX02質(zhì)粒。實驗 中沒有找到染色體上的差異，推測可能在與篩選的數(shù)量不夠有關(guān)也可能是SSH技術(shù) 本身的局限性造成的。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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3 李愛清;;差減雜交技術(shù)在原核生物基因差異比較中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2003年06期

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5 胡昌華,鮑朗;抑制消減雜交技術(shù)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2001年01期

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10 鮑朗,胡昌華,李學(xué)敏,晏菊芳,張萬江,張會東;利用抑制消減雜交技術(shù)研究鉤端螺旋體致病相關(guān)基因[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年05期

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4 張萬坡;禽流感病毒感染雞的病毒定位及基因差異表達(dá)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

5 謝紅濤;梅山×大白F1代與其親本梅山豬背最長肌間差異表達(dá)基因的克隆鑒定及特征分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

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3 李愛清;幽門螺桿菌對甲硝唑耐藥相關(guān)基因片段的篩選及克隆分析[D];浙江大學(xué);2004年

4 饒星;沙門菌三種血清型鞭毛基因重組及免疫學(xué)檢測方法研究[D];吉林大學(xué);2008年

5 王紅;雛鴨感染Ⅰ型鴨肝炎病毒相關(guān)基因的篩選[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

6 劉艷群;結(jié)核分支桿菌H37Rv與H37Ra的差異表達(dá)基因研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號：2803465