【摘要】：GST-π是谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶超基因家族中的成員之一，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及多藥耐藥等關(guān)系密切。在癌前病變及腫瘤組織中表達(dá)明顯增高。但對(duì)其表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制還所知甚少。我們應(yīng)用人肺癌變啟動(dòng)模型，探討OST-π基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制，并就蛋白激酶C(PKC)對(duì)GST-π表達(dá)的調(diào)節(jié)作用以及GST-π與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的關(guān)系進(jìn)行初步探討和分析。 1，用致癌素(CSC、DEN、MNU)短期處理人胚肺組織，提取DNA轉(zhuǎn)染Rat-1細(xì)胞，使其發(fā)生轉(zhuǎn)化。以ELISA和Northern Blot等方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞GSTs酶活性，GST-π，GST-π mRNA表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組細(xì)胞(P＜0.05)。人肺癌變啟動(dòng)過程中，GST-π表達(dá)升高可能參與啟動(dòng)細(xì)胞“抗性表型”的組成，使其易于獲得克隆性優(yōu)勢(shì)生長的能力。mRNA穩(wěn)定性分析及進(jìn)行中的核轉(zhuǎn)錄分析(Run-on assay)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化細(xì)胞GST-π mRNA穩(wěn)定性明顯高于對(duì)照組細(xì)胞，而GST-π mRNA轉(zhuǎn)錄活性未見明顯差異。轉(zhuǎn)錄后調(diào)控可能是轉(zhuǎn)化細(xì)胞GST-π mRNA表達(dá)增高的主要機(jī)制。 2，分別用蛋白激酶C激活劑TPA和抑制劑H_7處理GST活性不同的各種細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)TPA在一定范圍內(nèi)可上調(diào)GSTs活性、GST-π蛋白和GST-π mRNA表達(dá)水平，而H_7具下調(diào)作用。PKC分三大組近十余種亞類，每類又表現(xiàn)出獨(dú)特的生物學(xué)作用，為進(jìn)一步明確說明問題，我們構(gòu)建了PKCα cDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，并以Lipofactin介導(dǎo)的方法將其轉(zhuǎn)入GLC細(xì)胞，經(jīng)G_(418)篩選獲得陽性細(xì)胞克隆。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞形態(tài)學(xué)無明顯差異。反義PKCα轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長緩慢，生存能力下降。正義PKCα轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其GSTs、GST-π蛋白含量均有不同程度的上升。PKC是信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，發(fā)揮著廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。PKC對(duì)GST的表達(dá)調(diào)節(jié)可能通過兩種機(jī)制：一是對(duì)GST蛋白的直接
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1995
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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1 李中騫;人肺癌變啟動(dòng)研究[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1993年04期

本文編號(hào)：2801902