【摘要】：GST-π是谷胱甘肽-S-轉移酶超基因家族中的成員之一，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及多藥耐藥等關系密切。在癌前病變及腫瘤組織中表達明顯增高。但對其表達調控的分子機制還所知甚少。我們應用人肺癌變啟動模型，探討OST-π基因表達的轉錄與轉錄后調控機制，并就蛋白激酶C(PKC)對GST-π表達的調節(jié)作用以及GST-π與細胞凋亡、細胞增殖的關系進行初步探討和分析。 1，用致癌素(CSC、DEN、MNU)短期處理人胚肺組織，提取DNA轉染Rat-1細胞，使其發(fā)生轉化。以ELISA和Northern Blot等方法檢測發(fā)現(xiàn)，轉化細胞GSTs酶活性，GST-π，GST-π mRNA表達水平均明顯高于對照組細胞(P＜0.05)。人肺癌變啟動過程中，GST-π表達升高可能參與啟動細胞“抗性表型”的組成，使其易于獲得克隆性優(yōu)勢生長的能力。mRNA穩(wěn)定性分析及進行中的核轉錄分析(Run-on assay)結果表明，轉化細胞GST-π mRNA穩(wěn)定性明顯高于對照組細胞，而GST-π mRNA轉錄活性未見明顯差異。轉錄后調控可能是轉化細胞GST-π mRNA表達增高的主要機制。 2，分別用蛋白激酶C激活劑TPA和抑制劑H_7處理GST活性不同的各種細胞系，發(fā)現(xiàn)TPA在一定范圍內可上調GSTs活性、GST-π蛋白和GST-π mRNA表達水平，而H_7具下調作用。PKC分三大組近十余種亞類，每類又表現(xiàn)出獨特的生物學作用，為進一步明確說明問題，我們構建了PKCα cDNA逆轉錄病毒表達載體，并以Lipofactin介導的方法將其轉入GLC細胞，經(jīng)G_(418)篩選獲得陽性細胞克隆。發(fā)現(xiàn)轉染與未轉染細胞形態(tài)學無明顯差異。反義PKCα轉染細胞生長緩慢，生存能力下降。正義PKCα轉染細胞，其GSTs、GST-π蛋白含量均有不同程度的上升。PKC是信號傳導途徑中的關鍵環(huán)節(jié)，發(fā)揮著廣泛的生物學效應。PKC對GST的表達調節(jié)可能通過兩種機制：一是對GST蛋白的直接
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：1995
【分類號】：R346

【參考文獻】

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1 李中騫;人肺癌變啟動研究[J];生理科學進展;1993年04期

本文編號：2801902