【摘要】： 哺乳動(dòng)物的精子發(fā)生是一個(gè)獨(dú)特的細(xì)胞分裂分化過程。睪丸曲細(xì)精管生精上皮的生精細(xì)胞經(jīng)過一系列復(fù)雜的分裂分化過程，最終形成成熟的精子。整個(gè)精子發(fā)生過程經(jīng)歷了三個(gè)階段：即精原細(xì)胞的增殖、精母細(xì)胞的減數(shù)分裂和精子細(xì)胞的變態(tài)過程。成年睪丸的主要的功能是生成精子和產(chǎn)生雄性激素。許多在睪丸中特異表達(dá)或高度表達(dá)的蛋白質(zhì)參與了這一過程。分離和鑒定睪丸內(nèi)精子發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)，對(duì)于在蛋白質(zhì)水平上闡明精子發(fā)生的分子機(jī)制，對(duì)臨床上男性不育的診斷和治療以及男性節(jié)育手段的研究等均具有重要的理論意義。 傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分離和鑒定首先是運(yùn)用不同的手段將生物組織中的蛋白質(zhì)抽提出來，再用色譜、層析或電泳等方法使不同的蛋白質(zhì)組分分開，最后借助某些特異性的酶對(duì)其一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，從而鑒定蛋白質(zhì)。十九世紀(jì)七十年代雙向凝膠電泳的發(fā)明，尤其是十九世紀(jì)八十年代的軟電離技術(shù)的問世導(dǎo)致質(zhì)譜技術(shù)發(fā)生了革命性的飛躍，再加上生物信息學(xué)的發(fā)展使得蛋白質(zhì)的分離和鑒定克服了已往實(shí)驗(yàn)方法耗時(shí)長(zhǎng)和通量低等缺點(diǎn)，從而使從蛋白質(zhì)組水平上分離和鑒定蛋白質(zhì)成為可能。然而，國(guó)內(nèi)至今還未見有將這兩種技術(shù)應(yīng)用于生殖醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的報(bào)道。 為了分離和鑒定與精子發(fā)生相關(guān)的蛋白質(zhì)，本研究首先建立了運(yùn)用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)分離和鑒定小鼠睪丸蛋白質(zhì)的技術(shù)平臺(tái)。提取成年小鼠睪丸總蛋白，第一相電泳分別用不同長(zhǎng)度的膠條進(jìn)行等電聚焦，然后用不同的檢測(cè)手段進(jìn)行檢測(cè)，以獲取最佳的分離條件； 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 切取凝膠上的蛋白點(diǎn)，酶解后用質(zhì)譜分析得到其肽質(zhì)量指紋譜；數(shù)據(jù) 庫(kù)檢索明確地鑒定了蛋白質(zhì)。其次，為了分離與小鼠精子發(fā)生相關(guān)的 蛋白質(zhì)，我們應(yīng)用雙向凝膠電泳分離一周齡和七周齡小鼠睪丸蛋白提 取液，經(jīng)計(jì)算機(jī)軟件圖像分析和比較后，得到了49個(gè)在七周齡小鼠 睪丸中高表達(dá)的蛋白點(diǎn)，然后用質(zhì)譜技術(shù)成功地鑒定了其中的22種 蛋白質(zhì)，其中有13種已被證實(shí)與精子發(fā)生相關(guān)，其它9種蛋白質(zhì)在 睪丸中未見相關(guān)報(bào)道，這些在小鼠睪丸不同發(fā)育階段差異表達(dá)的蛋白 質(zhì)可能在精子發(fā)生中起重要作用。 綜上所述，我們成功地建立了運(yùn)用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)分離 和鑒定睪丸蛋白質(zhì)的技術(shù)平臺(tái)，并運(yùn)用該技術(shù)平臺(tái)對(duì)不同發(fā)育階段的 小鼠睪丸蛋白質(zhì)組進(jìn)行了分離和比較，鑒定了22個(gè)在成年小鼠睪丸 高表達(dá)的蛋白質(zhì)，為從蛋白質(zhì)組水平上研究精子發(fā)生的機(jī)制奠定了堅(jiān) 實(shí)的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R321
【圖文】：

上樣量為80wg，第一相采用llcmIPG膠條分離的銀染雙向凝膠電泳照片

上樣量為800協(xié)g，第一相采用24cmIPG膠條分離的考染雙向凝膠電泳照片

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本文編號(hào)：2801673