【圖文】：

1條為3 015 bp的PGEM-Teasy克隆載體,另1條為600~700 bp之間的γ2鏈Ⅳ功能區(qū)基因;與空克隆載體對照重組質(zhì)粒PCR反應得到1條600 bp左右條帶(圖1)。測序結果證實,得到的是含長647 bp LN-5γ2鏈IV功能區(qū)基因克隆載體。1:克隆載體PCR產(chǎn)物; 2:空PGEM-TeasyPCR; 3:DNA標準帶DL1500;4:重組質(zhì)粒EcoRI/BamHI雙酶切; 5:λHindIIIDNA標準帶/DNA標準帶DL1500圖1　克隆載體雙酶切鑒定、PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖3.重組表達載體及表達蛋白鑒定:通過重組pBV220及PBV220EcoRI/BamHI雙酶切鑒定,重組pBV220被切為2條DNA條帶,3660 bp 1條帶為pBV220載體,600~700 bp間的條帶為γ2鏈IV功能區(qū)基因;而空pBV220僅1條DNA帶(圖2),證實構建出重組表達載體。含PBV220表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α誘導后,經(jīng)聚丙烯凝膠電泳和凝膠成像系統(tǒng)分析(圖3),發(fā)現(xiàn)1條分子量26 000

表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α誘導后,經(jīng)聚丙烯凝膠電泳和凝膠成像系統(tǒng)分析(圖3),發(fā)現(xiàn)1條分子量26 000,占菌體總蛋白60%的表達蛋白(圖4),且與含γ2鏈Ⅳ功能區(qū)蛋白分子量一致。三、討論在本試驗中,當原代細胞培養(yǎng)至細胞融合時,提取RNA質(zhì)量較高。這可能與分離消化表皮時,酶對細胞的損傷或分離時間過長,RNA被降解有關。研究選用pBV220載體可用于多種外源基因的表達,其表達量占菌體總蛋白60%~80%。另外,外源基因ATG與SD序列之間的合適距離一般為4~10個核苷酸即可

【共引文獻】

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3 歐陽松應,徐壽水,沈文律,周傳香,李春艷,歐陽紅生;人PTEN基因表達載體的構建及其在U_(251)細胞中的表達[J];癌變.畸變.突變;2004年04期

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5 李俊華;吳少庭;翁亞彪;甘燕;劉洪波;劉茂鈴;張仁利;高世同;黃達娜;耿藝介;;弓形蟲致密顆粒蛋白GRA4基因體外擴增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表達[A];全國寄生蟲學與熱帶醫(yī)學學術研討會論文集[C];2006年

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本文編號：2792651