發(fā)布時間：2020-08-13 08:23

【摘要】：16-24周孕齡的人胎肝是一個處于發(fā)育時相的器官，不僅擔負著物質代謝、蛋白分泌等重要生理功能，而且具有造血的機能，采用蛋白質組學研究手段系統(tǒng)發(fā)掘胎肝內蛋白信息將助于進一步了解胎肝機能。在蛋白質組研究中，低豐度蛋白是研究的主要瓶頸，目前解決的方法主要有兩類，一是去除樣品中的高豐度蛋白質；二是對樣品進行分級，簡化樣品的復雜性。由于真核生物細胞結構的特殊性，使得亞細胞分級得以實現，通過這種方法既可以降低樣品的復雜性又可實現通量化。本文通過蔗糖密度梯度離心的方法建立了細胞核蛋白提取的平臺，采用免疫印跡、酶活測定和電鏡的方式來觀測細胞核提純的程度，結果表明細胞核富集了5倍以上。在此基礎上又根據蛋白的性質采用試劑盒進行進一步細化的分級，分為疏水、親水和沉淀三部分。最后采用一維凝膠電泳和液相色譜質譜聯用技術鑒定，總共獲得422個總蛋白數據，其中明確定位于細胞核的蛋白145個，由基因組推測的新蛋白共有16個以及9個SWISS-PROT注釋表明在肝臟中處于低豐度的蛋白。我們還對所得數據進行了蛋白性質分析、定位分析，表明核蛋白多為偏堿性的親水性蛋白。由功能分類、數據庫比較得到的信息顯示所得到的核蛋白多為結構蛋白和參與RNA剪切且為大多數細胞所具有的蛋白。組織表達分類表明有許多蛋白不僅在肝中表達而且在腦及睪丸中也高表達，提示胎肝內表達的一些蛋白可能具有廣泛的生理調節(jié)功能。對新蛋白的定位預測表明有10個蛋白可能在細胞核中表達。通過以上的生物信息學分析和文獻調研綜合，初步構建了人胎肝的細胞核蛋白質表達譜。
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R341

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本文編號：2791758