【摘要】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)是世界上最常見的病原菌之一，是慢性B型胃炎和消化性潰瘍的重要致病因子，也與胃癌和粘膜相關(guān)樣淋巴組織淋巴瘤有一定的關(guān)系。1994年，世界衛(wèi)生組織(WHO)正式將H.pylori列為人類的第一類致癌劑(Group I carcinogen)，美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心也將H.pylori感染性疾病列為近年新出現(xiàn)的傳染病。 但在H.pylori的研究領(lǐng)域中，有些問題至今仍未闡明，如H.pylori在自然人群中的感染率近60％，但有近20～30％的感染者可終身攜帶H.pylori而不發(fā)病；50％以上的感染者僅有不同程度的慢性炎癥；10～15％可發(fā)生消化性潰瘍；只有極少數(shù)發(fā)生胃部惡性腫瘤。這些不同的疾病結(jié)局是否與基因型別有關(guān)，目前尚未取得一致意見。造成此領(lǐng)域知識(shí)缺乏的主要原因是沒有一套合適的鑒別方法。 為廣哎才學(xué)么一子I生竿虜fM02屆J頎士畢業(yè)殷文 砌刀氟q勞帶丟墓歷HX’xrvn分折J致膨儀死史 基于Hpylori表型特征的一致性及基因組結(jié)構(gòu)高度變異 性的特點(diǎn)，本研究應(yīng)用PCREFLP方法，對(duì)臨床分離的46株 Hylori（其中潰瘍株2 5例，非潰瘍株刀例）的鞭毛基因 ＊agellin gene，F(xiàn)a gene）進(jìn)行分型，旨在探討鞭毛基因的 變異性及鞭毛基因分型在潰瘍組和非潰瘍組的分布有無(wú)差 別，為Hpylori的鑒別提供參考依據(jù)。 方法 1 幽門螺桿菌的分離培養(yǎng)：內(nèi)鏡下用常規(guī)方法取胃腸疾 病思者胃粘膜組織塊，涂抹法接種于改良布氏培養(yǎng)基上，37 OC恒溫培養(yǎng)箱微需氧環(huán)境培養(yǎng)5刁大，對(duì)可疑菌落進(jìn)行菌落 形態(tài)、石炭酸復(fù)紅染色觀察和生化鑒定，取陽(yáng)性者傳代。菌 不保存于－80 OC。 2 HPyloriW基因的PCR－RFLP分析：PCR擴(kuò)增46株 HPylori（其中潰瘍株 25例，非潰瘍株刀例）側(cè)基因中間 區(qū)域，1．5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，970hp位置 有一條帶者進(jìn)一步用 Hpall和 Hindlll內(nèi)切酶消化，2刀％瓊脂 糖凝膠電泳分離后得到尸d基因PCR－RFLP譜型，記錄結(jié) 果，進(jìn)行聚類分祈。 3 Hpylori M基因的 PCRKFLP分析：PCR擴(kuò)增 46株 HPylOOI（其中潰瘍株25例，非潰瘍株ZI例）加B基因中間 區(qū)域，1．5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，930hp位置 有一條帶者進(jìn)一步用 Hpa 11和 Hindlll內(nèi)切酶消化，2刀％瓊脂 2 斯W大算J生學(xué)貿(mào)C刃肥居）旋士畢業(yè)極艾 幽門燎抒菌般丟三歷PC尸rkYIP分行及紋厲爛研究 糖凝膠電泳分離后得到人aB基因PCR｝FLP譜型，記錄結(jié) 果，進(jìn)行聚類分析。 結(jié)果 ljlaA基因 PCR－RFLP分祈：46株 Hpylori iaA基因經(jīng) PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物長(zhǎng)度為970hp，進(jìn)一步將PCR產(chǎn)物用Hpa 11酶切后，產(chǎn)生4種酶切圖譜：Hilldlll酶切后產(chǎn)生3種酶切 圖譜，將j7aA基因 Hpall和 Hindlll酶切圖譜進(jìn)行編碼并用統(tǒng) 計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行聚類分祈，可將仰基因分為三型（I型、11 型和Ill型），三型在潰瘍組和非潰瘍組的構(gòu)成比無(wú)差別 （尸＝0．294）。 2 iaB基因 PCR－RFLP分析：Hpylori iaB基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 930hp，Hpa 11酶切后，僅有 l種酶切圖 譜：HilldIJI酶切后有 2種酶切圖譜，綜和尸。B基因 Hps 11 和 Hindlll酶切圖譜，可將 M基因分為兩型（1型和 11 型），二型在潰瘍組和非潰瘍組的構(gòu)成比也無(wú)差別 （尸＝0．658）。 3j7aA和加B基因綜合分型結(jié)果：將j7aA和j7aB基因 的fLP圖譜編碼并輸入SPSS10刀軟件進(jìn)行聚類分祈，選擇 合適的分界點(diǎn)，46株 Hpyloj’l可分為三型（I型、11型和Ill 型），三型在潰瘍組和非潰瘍組的構(gòu)成比仍無(wú)差別 0二0．294）。 結(jié)論 3 鄭訓(xùn)丈學(xué)牙＃J主學(xué)裙c刃02屠J＠士畢業(yè)活文 幽／刀揖年菌鞭宅募毋尸口尸1W℃尸分折上反厲注研滅 1 我國(guó)臨床分離的 Hpylorij7a基因比較保守，絕大多數(shù) 菌株具有的相同 Hpa 11和 Hindlll酶切圖譜。 2首次顯示國(guó)內(nèi) Hpylori加基因 Hpa 11和 Hindlll主紋圖 譜示意圖，作為一種標(biāo)準(zhǔn)方法建立的標(biāo)志，為今后j7a基因 PCR－RFLP分析提供參考依據(jù)。 3 首次運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行聚類分析，將我國(guó)46株臨 床分離的Hpyloride基因分為三型。 4 初步證明了加基因型別與不同的胃十二指腸疾病無(wú) 關(guān)，這為臨床上 Hpytori疾病相關(guān)株和非疾病相關(guān)株的鑒別 提供了參考依據(jù)。建議今后Hpylori的鑒別應(yīng)重在比較疾病 相關(guān)株和非疾病相關(guān)株之間的差別，而不應(yīng)僅局限于不同胃 十二指腸疾病結(jié)局之間的比較。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R378

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 夏曉燕;幽門螺桿菌鞭毛基因的克隆和表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2003年

本文編號(hào)：2786798