【摘要】： 肺炎鏈球菌(streptococcus pneumoniae , S.pn)感受態(tài)是一種狀態(tài)，細(xì)菌在這種狀態(tài)下能夠攝取外來基因或者質(zhì)粒DNA。目前的研究認(rèn)為感受態(tài)是S.pn的重要生理特征，感受態(tài)的形成與細(xì)菌生長、毒力因子生成、孢子形成、耐藥性產(chǎn)生、質(zhì)粒整合、基因轉(zhuǎn)化等都有密切關(guān)系，它是細(xì)菌對環(huán)境刺激作出反應(yīng)的結(jié)果。感受態(tài)相關(guān)基因是在感受態(tài)形成中才大量表達(dá)的特殊基因，它與感受態(tài)形成密切相關(guān)。研究感受態(tài)相關(guān)基因，在闡明感受態(tài)形成的機(jī)制，繼而研究細(xì)菌變異、進(jìn)化和致病等方面有重要作用。 目的：挑選三種感受態(tài)相關(guān)基因（comE、comX、cinA）和一種毒力基因dnaK，通過逆轉(zhuǎn)錄PCR比較它們在肺炎鏈球菌野生型和comE缺陷型菌株對數(shù)生長期的不同階段mRNA水平表達(dá)情況，研究comE、comX、cinA在感受態(tài)形成中的作用，論證comE缺陷型菌株作為感受態(tài)缺陷菌株的可行性，同時對dnaK是否也是一種感受態(tài)相關(guān)基因及其與感受態(tài)的關(guān)系作初步探討。 WP=5 方法：用CTM培養(yǎng)基培養(yǎng)野生型肺炎鏈球菌，在肺炎鏈球菌對數(shù)生長期不同階段提取RNA，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄后，采用PCR方法對幾種基因進(jìn)行擴(kuò)增后，觀察comE、comX、cinA以及dnaK在不同階段的表達(dá)情況，然后按同樣方法觀察comE缺陷菌株中comX、cinA以及dnaK在不同階段的表達(dá)情況。 結(jié)果：1. comE、comX、cinA三種基因在野生型肺炎鏈球菌不同階段的表達(dá)很相似，即在生長初期，三種基因均不表達(dá)或表達(dá)很弱，然后在某一相同時期，三種基因的表達(dá)都明顯的增強(qiáng)，這說明三者在感受態(tài)形成中的表達(dá)存在協(xié)同性和相似性。而在comE缺陷菌株中，comX和cinA在所有時間段均未見表達(dá)。 2. dnaK在野生型和comE缺陷型生長各階段都有表達(dá)，而且在兩種類型的菌株中其表達(dá)趨勢沒有明顯差異，其在野生型和comE缺陷型中的表達(dá)與comE、comX和cinA完全不一樣。 3. 體外人為誘導(dǎo)了肺炎鏈球菌感受態(tài)產(chǎn)生，在CTM培養(yǎng)基中，細(xì)菌生長的某一時間段，感受態(tài)相關(guān)基因comE、comX、cinA表達(dá)突然增強(qiáng)。說明此時肺炎鏈球菌形成感受態(tài)。 結(jié)論：肺炎鏈球菌在CTM培養(yǎng)基生長時，某一時期出現(xiàn)感受態(tài)相關(guān)基因的大量表達(dá)，說明在外界可以人為誘導(dǎo)肺炎鏈球菌感受態(tài)形成；comE缺陷型可以造成其它兩種感受態(tài)相關(guān)基因不表達(dá)，提示 comE可能在肺炎鏈球菌感受態(tài)形成中起關(guān)鍵作用，能控制其它感受態(tài)相關(guān)基因 WP=6 的表達(dá)，因此可以考慮利用comE缺陷型作為肺炎鏈球菌感受態(tài)缺陷菌株，進(jìn)行肺炎鏈球菌致病機(jī)理的研究；dnaK在野生型和comE缺陷型中均表達(dá)，特別是在野生型肺炎鏈球菌感受態(tài)形成階段dnaK的表達(dá)沒有發(fā)生明顯的變化，說明dnaK與肺炎鏈球菌感受態(tài)形成關(guān)系不大，它可能不是一種感受態(tài)相關(guān)基因。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R346

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本文編號：2779385