【摘要】： 目的：利用酵母雙雜合體系篩選乙型肝炎病毒前S1(preS1)蛋白相關(guān)蛋白，以利于探討前S1蛋白在乙型肝炎病毒的入胞機制。 方法：以HBVDNA陽性血清為模板通過PCR法擴增含EcoRI與PstI酶切位點的pres1基因序列，pAS2-1載體及pres1基因PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切并連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM105，對重組質(zhì)粒pAS2-1-pres1進行序列測定。乙酸鋰轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入酵母菌AH109，以Western Blot法證實重組質(zhì)粒在酵母細胞中的表達。將pAS2-1-pres1及正常成人肝細胞cDNA文庫共轉(zhuǎn)化酵母細胞，通過選擇性培養(yǎng)、LacZ活性測定篩選陽性菌落，分離實驗及交合實驗排除假陽性，PCR擴增陽性克隆的目的基因并進行序列測定，結(jié)果提交NCBI的BLAST應用程序，在GeneBank數(shù)據(jù)庫查詢其同源序列。 結(jié)果：重組質(zhì)粒pAS2-1-pres1經(jīng)序列測定含有完整的pres1基因片段，Western Blot證實轉(zhuǎn)化的酵母細胞能正確表達完整的pres1-BD融合蛋白，pAS2-1-pres1及正常成人肝細胞cDNA文庫共轉(zhuǎn)化酵母細胞后，在5×10~6轉(zhuǎn)化子中，經(jīng)選擇性培養(yǎng)共長出97個菌落，17個為LacZ陽性菌落，分離實驗及交合試驗篩選出1個陽性菌落，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)GenBank數(shù)據(jù)庫查詢與人類初期多肽相關(guān)復合體a亞單位(Homo sapiensnascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide NACA)同源。 結(jié)論：成功構(gòu)建了 pASZ刁個 真核表達載體，并通過酵母雙雜合 體系篩選體內(nèi)與 presl相互作用的蛋白 NACA。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2774701