【摘要】： Sydecan-1(CD138)分子是跨膜粘結(jié)蛋白聚糖家族成員，由胞漿段、跨膜段和胞外段組成。Sydecan-1主要通過胞外段HS側(cè)鏈可與細(xì)胞外一系列配基結(jié)合，如粘附分子、基質(zhì)成分肝素結(jié)合生長因子、酶和酶抑制物及某些血漿蛋白等，以共受體方式調(diào)節(jié)細(xì)胞與微環(huán)境之間的相互作用，參與組織器官分化發(fā)育、血管形成和組織再生等一系列生理過程的調(diào)節(jié)。 目前，對Sydecan-1分子的研究主要集中在Sydecan-1分子的表達(dá)與惡性實體瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系。目前，許多腫瘤如多發(fā)性骨髓瘤、肝癌、乳腺癌和鱗狀細(xì)胞癌已將Sydecan-1分子表達(dá)的降低作為癌細(xì)胞進(jìn)一步惡化和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。因此，Sydecan-1分子可作為腫瘤疾病預(yù)后的一個重要指標(biāo)。鑒此，進(jìn)行Sydecan-1分子的單克隆抗體(mAb)的研制及利用Sydecan-1分子的mAb研究Sydecan-1分子的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞作用機制的研究是很有必要的。同時，Sydecan-1分子的mAb的研制對進(jìn)一步開展用于檢測Sydecan-1分子的試劑盒的研制工作提供必要的前提。 本研究的目的：獲得鼠抗人Sydecan-1分子的單克隆抗體(mAb)，同時，利用研制出的Sydecan-1 mAb進(jìn)一步研究 抗人 Sydecan－l單克隆抗體的制備及其生物學(xué)功能研究 摘要 Sydecan八分子的表達(dá)對腫瘤細(xì)胞的作用。實驗方法：（）以高表 達(dá)人Sydecand分子的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226為免疫原，兔疫 Balb匯小鼠；Q）采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫的小鼠脾臟細(xì) ．胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2／0融合；u）通過間接免疫熒光標(biāo)記對雜 交瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選；門）Illi’b識別抗原位點的競爭抑制實驗測 定InAb與PE－直標(biāo)單抗的位點的關(guān)系；3）采用常規(guī)方法制備染 色體，對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行核型分析：“）采用免疫親和層析法對腹 水型mAb進(jìn)行純化；（）快速試紙鑒定mAblg類型；3）采用 間接免疫熒光標(biāo)記法測定單克隆抗體的效價；乃）單克隆抗體對骨 髓瘤細(xì)胞XG葉、XG《的生長抑制試驗。實驗結(jié)果：獲得一株鼠抗人 Sydecan＊分子的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，命名為4B3，其染色體 ；數(shù)大于100條，經(jīng)體外長期傳代培養(yǎng)，液氮凍存半年以上反復(fù)復(fù)蘇 良好，分泌特異性抗體性能穩(wěn)定。4B3分泌的InAb識別位點與兩種 單抗BB4和M15識別位點相同或相近，重鏈屬IgGI亞類，輕鏈為 。型，純化后腹水中 InAb蛋白的得率為 2．gmg／ffil，加入 4B3InAb后 的XGd、XG七細(xì)胞體外生長受到抑制，由此表明，4B3為功能性抗 人sydecanl單克隆抗體，這對研究sydecan葉分子的生物學(xué)特性 具有重要的價值。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R392.11

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本文編號：2766768