【摘要】：[目的] 構(gòu)建survivin重組質(zhì)粒并在原核系統(tǒng)中表達(dá)，獲取高純度的重組人survivin蛋白分子，免疫豚鼠制備抗-survivin特異性抗體。為survivin的深入研究提供基礎(chǔ)。 [方法] 應(yīng)用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并構(gòu)建成pBV220-survivin原核表達(dá)質(zhì)粒，將其導(dǎo)入E.coli B121(Gold)中，誘導(dǎo)表達(dá)survivin蛋白，用Western blot檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。通過(guò)DEAE Sepharose Fast Flow離子交換柱和Sephacryl S-200分子篩二步柱純化以獲取目的蛋白。將獲取蛋白免疫豚鼠得到抗survivin抗體，ELISA測(cè)定抗體效價(jià)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)該抗體能否特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞中survivin蛋白。 結(jié)果 RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序分析與預(yù)期結(jié)果完全一致，表達(dá)質(zhì)粒在E.coli B121(Gold)中得到高效表達(dá)，表達(dá)的survivin蛋白占總蛋白含量的30％以上，表達(dá)產(chǎn)物以包涵體的形式存在，Western blot證明表達(dá)產(chǎn)物具特異性。通過(guò)離子交換柱和分子篩二步柱純化及復(fù)性后獲得的目的蛋白，其純度達(dá)到95％以上。將獲取蛋白免疫豚鼠后，ELISA測(cè)定抗體效價(jià)為1：1000，免疫組織化學(xué)表明抗survivin抗體能特異性識(shí)別腫瘤組織中survivin蛋白。 結(jié)論 本研究通過(guò)基因工程方法制備抗survivin特異性抗體，為篩選survivin在人類不同種類腫瘤中表達(dá)差異，進(jìn)一步為研究survivin與腫瘤的關(guān)系了奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2763096