【摘要】： 目的：通過對幽門螺桿菌CagA蛋白肽段的基因克隆和表達(dá)，確定CagA蛋白中與相應(yīng)抗體親和力最強(qiáng)的肽段，為制備幽門螺桿菌高毒株感染血清學(xué)診斷試劑盒奠定基礎(chǔ)。 方法：根據(jù)幽門螺桿菌cagA全基因序列以DNAMAN軟件設(shè)計五對引物，采用PCR方法擴(kuò)增出五條幽門螺桿菌cagA基因片段。采用堿裂解法提取原核表達(dá)載體質(zhì)粒pGEX-3X，并對其進(jìn)行單酶切。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物插入至原核表達(dá)載體pGEX-3X中，采用氯化鈣轉(zhuǎn)化法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10中，形成五種重組質(zhì)粒。先通過氨芐平板初步篩選，再采用PCR方法篩選轉(zhuǎn)化陽性的質(zhì)粒，最后通過核酸限制性內(nèi)切酶酶切及測序確定其連接方向。經(jīng)篩選為陽性的重組質(zhì)粒以1mMol／L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，預(yù)測所表達(dá)的CagA蛋白肽段分子大小分別為66KD、29KD、36KD、99KD和63KD，并以包涵體的形式存在。包涵體經(jīng)8Mol／L尿素初步純化后，運(yùn)用ELISA方法檢測其抗原性并確定相應(yīng)抗體親和力最強(qiáng)的CagA蛋白肽段。 結(jié)果：五條cagA基因片段在大腸桿菌中都得到了表達(dá)，表達(dá)的蛋白均具有強(qiáng)弱不等的抗原性，其中66KD的蛋白肽段與抗CagA抗體親和力最強(qiáng)。 結(jié)論：66KD的蛋白肽段與抗CagA抗體親和力最強(qiáng)
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉炯,許國銘;幽門螺桿菌cag致病島的研究進(jìn)展[J];中華消化雜志;1999年06期

本文編號：2760120