本文關(guān)鍵詞：不同方法制備富血小板纖維蛋白對脂肪干細(xì)胞體外增殖影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:旨在通過不同離心速度及離心時間制備富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin,PRF),比較其內(nèi)所含生長因子特別是血小板衍生生長因子-AB(Platelet-derived growth factor,PDGF-AB)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-beta1,TGF-β1)含量及其對脂肪來源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)體外增殖的情況,為將制備出優(yōu)良的PRF應(yīng)用于軟組織創(chuàng)面修復(fù)提供實驗依據(jù)。方法:取新西蘭大耳白兔腹股溝部脂肪組織,使用膠原酶消化法處理脂肪組織,培養(yǎng)原代脂肪干細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)及變化,通過血球計數(shù)板于倒置顯微鏡下計數(shù)并繪制細(xì)胞生長曲線圖,收集第3代細(xì)胞進(jìn)行體外三系誘導(dǎo)分化,在誘導(dǎo)7天、14天、28天時間里,分別加入成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行油紅O染色、成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行Von Kossa染色、成神經(jīng)誘導(dǎo)液培養(yǎng)基后行免疫細(xì)胞熒光檢測,鑒定ADSCs多向分化潛能;取新西蘭大耳白兔自體靜脈血,分別以不同速度(2700 r/min、3000 r/min、3300 r/min)、不同時間(10min、15 min、20 min)離心制備PRF,通過ELISA試劑盒對每個PRF在靜置7天、14天、21天時間里,釋放液中TGF-β1和PDGF含量進(jìn)行檢測,觀察各組生長因子的濃度差異;CCK-8比色法檢測不同方法制備的PRF對ADSCs細(xì)胞體外增殖活性的影響。結(jié)果:原代培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣貼壁生長,具有很強的增殖能力,并成功向成神經(jīng)元細(xì)胞、骨組織細(xì)胞和脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化,即具有干細(xì)胞特性,因而所培養(yǎng)的細(xì)胞為脂肪來源干細(xì)胞(ADSCs)。同一靜置時間下,以2700 r/min,15 min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于10 min組及20 min組;以3000 r/min,10min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于15 min組及20 min組;且2700 r/min,15min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于3000 r/min,10 min組(P㩳0.05);以3300 r/min組的離心速度下,不同離心時間制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量無統(tǒng)計學(xué)意義(P㧐0.05)。CCK-8比色法檢測2700r/min,15 min組制備的PRF對ADSCs增殖的OD值高于3000 r/min及3300 r/min組(P0.05)。結(jié)論:來源于動物脂肪吸收物通過膠原酶消化、分離、原代培養(yǎng)的方法可獲得大量的具有干細(xì)胞特性的ADSCs;通過精確的方法制備PRF更能促進(jìn)脂肪干細(xì)胞體外增殖,有望將制備優(yōu)良的PRF應(yīng)用于皮膚軟組織缺損創(chuàng)面修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：富血小板纖維蛋白 脂肪來源干細(xì)胞 離心方法
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 英文縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-14
• 1.1 研究背景11
• 1.2 富血小板纖維蛋白11-13
• 1.2.1 血小板衍生生長因子12
• 1.2.2 轉(zhuǎn)化生長因子12
• 1.2.3 血管內(nèi)皮生長因子12-13
• 1.2.4 胰島素樣生長因子13
• 1.3 本研究思路13-14
• 第2章 兔ADSCs的原代和傳代培養(yǎng)14-20
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 實驗動物及組織來源14
• 2.1.2 主要實驗試劑14
• 2.1.3 主要儀器14-15
• 2.2 方法15-17
• 2.2.1 主要試劑的配制方法15
• 2.2.2 ADSCs原代培養(yǎng)并傳代15-16
• 2.2.3 ADSCs傳代培養(yǎng)16
• 2.2.4 細(xì)胞凍存16-17
• 2.2.5 細(xì)胞復(fù)蘇17
• 2.3 結(jié)果17-18
• 2.3.1 原代及傳代ADSCs的形態(tài)學(xué)特征17
• 2.3.2 細(xì)胞計數(shù)及繪制第3代ADSCs生長曲線17-18
• 2.4 結(jié)論18-20
• 第3章 兔脂肪干細(xì)胞鑒定20-23
• 3.1 材料20
• 3.2 脂肪干細(xì)胞多向誘導(dǎo)分化鑒定20-22
• 3.2.1 成脂誘導(dǎo)和油紅O染色20-21
• 3.2.2 成骨誘導(dǎo)和Von Kossa染色21
• 3.2.3 成神經(jīng)誘導(dǎo)和免疫細(xì)胞化學(xué)熒光21-22
• 3.3 結(jié)果22
• 3.3.1 成脂誘導(dǎo)后觀察22
• 3.3.2 成骨誘導(dǎo)后觀察22
• 3.3.3 成神經(jīng)誘導(dǎo)后觀察22
• 3.4 結(jié)論22-23
• 第4章 PRF制備及其對ADSCs增殖情況23-30
• 4.1 材料23
• 4.1.1 主要試劑23
• 4.1.2 主要儀器23
• 4.2 方法23-24
• 4.2.1 不同離心方法制備PRF膜片23-24
• 4.2.2 不同實驗組離心后PRF生長因子含量比較24
• 4.2.3 CCK-8 比色法檢測各組細(xì)胞增殖比較情況24
• 4.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法24
• 4.3 結(jié)果24-29
• 4.3.1 自體富血小板纖維蛋白的性狀24-25
• 4.3.2 不同離心方法制備PRF膜釋放生長因子含量的比較25-28
• 4.3.3 CCK-8 比色法檢測各組細(xì)胞增殖情況（OD值）28-29
• 4.4 結(jié)論29-30
• 第5章 討論30-34
• 5.1 PRF的形成與結(jié)構(gòu)30-31
• 5.2 PRF制備與生長因子的關(guān)系31-32
• 5.3 PRF膜體外釋放PDGF-AB、TGF-β132
• 5.4 PRF生物特性及促ADSCS體外生長32-34
• 第6章 全文總結(jié)與展望34-35
• 6.1 全文總結(jié)34
• 6.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 附圖39-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)46-49

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：不同方法制備富血小板纖維蛋白對脂肪干細(xì)胞體外增殖影響的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：275928