【摘要】： 背景：近年來(lái)，男性不育的原因及其相關(guān)機(jī)制受到學(xué)者們的重視。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，過(guò)去五十年中男性精子質(zhì)量呈下降趨勢(shì)，環(huán)境因素被認(rèn)為是致病的主要因素，其中溫度作為一種外在因素引起男性不育也愈來(lái)愈被重視。研究表明：包括人類在內(nèi)的大部分哺乳動(dòng)物的睪丸需要一個(gè)比腹腔溫度低的環(huán)境，睪丸暴露在腹腔溫度或高于腹腔溫度可導(dǎo)致可復(fù)性的生精障礙和生精細(xì)胞退化，引起暫時(shí)的、部分或完全性不育，其機(jī)制尚不完全清楚，其中熱作用后生精細(xì)胞的凋亡可能起了重要作用，已引起學(xué)者們關(guān)注。如對(duì)隱睪患者的研究表明，睪丸處于腹腔溫度引起生精細(xì)胞的凋亡是導(dǎo)致隱睪患者不育的原因之一。但目前對(duì)熱作用后生精細(xì)胞凋亡的研究尚不足，尤其熱作用后各類生精細(xì)胞凋亡的敏感性的研究亦不統(tǒng)一，并且對(duì)生精細(xì)胞受熱凋亡的分子機(jī)制缺乏深入研究。另一方面，在男性避孕方面的研究至今仍不理想，如廣為應(yīng)用的輸精管結(jié)扎術(shù)因其外科手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)，高耗費(fèi)和再通的困難都限制了它的應(yīng)用。近年來(lái)，學(xué)者們致力于探索更安全、有效、可恢復(fù)的男性避孕方法。作為探索安全、有效的男性避孕途徑之一，溫度對(duì)精子發(fā)生的影響受到重視。所以，建立熱處理的動(dòng)物模型，從細(xì)胞凋亡的角度探討熱作用后生精功能變化的機(jī)理，分析凋亡相關(guān)基因的調(diào)控，將為探索和闡明男性不育的機(jī)制提供重要和有價(jià)值的資料，為臨床治療某些男性不育、加強(qiáng)勞動(dòng)保護(hù)和探索男性避孕打下基礎(chǔ)。 助頭大學(xué)曹學(xué)院碩士研兌全畢，必觸戈尸 目的:1)研究皋丸局部熱作用后生精細(xì)胞的變化，檢測(cè)生精細(xì)胞 的凋亡，以此闡明凋亡可作為熱作用后生精細(xì)胞變化的一種機(jī)制;2) 探索各類生精細(xì)胞對(duì)熱的敏感性，對(duì)熱作用引起生精障礙作更深入研 究;3)研究凋亡相關(guān)蛋白Fas和FasL在熱作用后生精細(xì)胞的表達(dá)情 況，在分子水平上探討熱作用誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡的機(jī)制。 材料與方法:雄性SPrague一Dawlcy(SD)大鼠，分籠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)實(shí) 驗(yàn)房(22℃)，給予規(guī)律光照(12h: 12h)，自由飲食，隨機(jī)分熱處理組和 對(duì)照組，熱處理組按熱處理后0.5、l、3、6、10、25、50和80d隨機(jī) 分成8個(gè)亞組(n=6)，每亞組相應(yīng)設(shè)立對(duì)照組(n二4)。熱處理組大鼠 陰囊浸于43℃恒溫水浴中30min，對(duì)照組浸于22℃水浴中30min。分 別在處理后0.5、l、3、6、10、25、50和80d采取標(biāo)本，檢測(cè)皋丸重 量變化，應(yīng)用HE染色觀察生精細(xì)胞組織學(xué)結(jié)構(gòu);采用電鏡、流式細(xì) 胞儀和原位末端標(biāo)記法(TdT一mediated dUDp一X niek end labeling， TUNEL)檢測(cè)皋丸局部受熱后生精細(xì)胞凋亡情況;應(yīng)用流式細(xì)胞儀和 免疫組化法測(cè)定Fas和FasL在熱作用后生精細(xì)胞的表達(dá)情況。 結(jié)果: 組織學(xué)檢測(cè):大鼠翠丸局部受熱后3d出現(xiàn)皋丸重量明顯減輕 (P0.01)，熱作用后以10d一25d翠丸重量減輕更嚴(yán)重，50d已開(kāi)始 恢復(fù)，但直到受熱后80d翠丸重量才恢復(fù)到基本正常。光鏡下熱作用 后攀丸生精上皮變薄，生精細(xì)胞排列紊亂，數(shù)量減少，有大量空泡生 成，出現(xiàn)染色質(zhì)邊集、呈月牙狀，可見(jiàn)多核巨細(xì)胞。以10一25d組織 學(xué)改變最明顯。50d部分生精小管上皮恢復(fù)，到80d生精小管內(nèi)生精 上皮大多恢復(fù)正常。 凋亡的檢測(cè):l)電鏡下熱處理各組可見(jiàn)染色質(zhì)濃縮、附著于核邊 緣呈新月形、核染色質(zhì)固縮、斷裂以及凋亡小體出現(xiàn)等生精細(xì)胞凋亡 的表現(xiàn)，以熱處理后0.5一6d組更常見(jiàn);2)流式細(xì)胞儀觀察，熱處理 助興大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩哇~班男全軟必討戈尸 各組均有亞單倍體細(xì)胞百分率明顯增高(P0.01)，尤以0.5一6d組更 明顯(eontrols:0.5d:2.85士0.66:ld:2.36士0.57;3d:2.71士0.49;6d:2.60 士0 .44;exPeriments:o.sd:23.85士5.59:ld:30.9士1.65;3d:21.55士0.42: “:22.98士1.53);對(duì)各類生精細(xì)胞DNA含量進(jìn)行分析表明，熱處理 后0.5一 50d組4C細(xì)胞百分比明顯低于對(duì)照組(P0.05);6d一SOd組 IC細(xì)胞的百分比明顯低于對(duì)照組(P0.05);3d一SOd組ZC細(xì)胞百分 比明顯高于對(duì)照組(P0.05)。3) TUNEL檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各熱處理組生精 細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯增多(P0.01)，尤以0.5一6d組更明顯(controls: 0 .sd:0.60士0.01;ld:0.55士0.06;3d:0.47士0.11;6d:0.48士0.11; exPeriments:0.5d:16.75士0.48:ld:27.75士0.85:3d:18士0.91:6d:16.25 士1.11)。熱作用后生精細(xì)胞凋亡陽(yáng)性定位觀察:0.5、1d組凋亡陽(yáng)性 主要定位在初級(jí)精母細(xì)胞;3d組出現(xiàn)大量的精子細(xì)胞和精子凋亡;6d、 10d組凋亡細(xì)胞以大核細(xì)胞和精母細(xì)胞多見(jiàn);SOd組多見(jiàn)于精原細(xì)胞和 精母細(xì)胞;80d組生精上皮大部分恢復(fù)，凋亡細(xì)胞多見(jiàn)于精原細(xì)胞。 Fas蛋白表達(dá):流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，熱處理各組Fas蛋白表達(dá) 均明顯高于其對(duì)照組(P0.01)，熱處理后ld組Fas表達(dá)最強(qiáng)。免疫 組化染色顯示:各組生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有陽(yáng)性表達(dá)， 熱處理后各組生精細(xì)胞Fas表達(dá)均增強(qiáng)。 FasL蛋白表達(dá):流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，熱處理后各組FasL蛋白 表達(dá)均明顯高于其對(duì)照組(P0.05)，熱處理后ld組FasL表達(dá)最強(qiáng)。 免疫組化染色顯示:各組生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有陽(yáng)性表 達(dá)，熱處理后各組生精細(xì)胞FasL表達(dá)均增強(qiáng)。 結(jié)論: l)熱作用引起大鼠翠丸生精上皮
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R363
【圖文】：

對(duì)照組皋丸組織透射電鏡照片(EMx7000)

對(duì)照組辜丸組織透射電鏡照片(EMx5000)

對(duì)照組翠丸組織透射電鏡照片(EMX7000)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2755050