【摘要】： 背景：近年來，男性不育的原因及其相關機制受到學者們的重視。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，過去五十年中男性精子質(zhì)量呈下降趨勢，環(huán)境因素被認為是致病的主要因素，其中溫度作為一種外在因素引起男性不育也愈來愈被重視。研究表明：包括人類在內(nèi)的大部分哺乳動物的睪丸需要一個比腹腔溫度低的環(huán)境，睪丸暴露在腹腔溫度或高于腹腔溫度可導致可復性的生精障礙和生精細胞退化，引起暫時的、部分或完全性不育，其機制尚不完全清楚，其中熱作用后生精細胞的凋亡可能起了重要作用，已引起學者們關注。如對隱睪患者的研究表明，睪丸處于腹腔溫度引起生精細胞的凋亡是導致隱睪患者不育的原因之一。但目前對熱作用后生精細胞凋亡的研究尚不足，尤其熱作用后各類生精細胞凋亡的敏感性的研究亦不統(tǒng)一，并且對生精細胞受熱凋亡的分子機制缺乏深入研究。另一方面，在男性避孕方面的研究至今仍不理想，如廣為應用的輸精管結(jié)扎術(shù)因其外科手術(shù)的風險，高耗費和再通的困難都限制了它的應用。近年來，學者們致力于探索更安全、有效、可恢復的男性避孕方法。作為探索安全、有效的男性避孕途徑之一，溫度對精子發(fā)生的影響受到重視。所以，建立熱處理的動物模型，從細胞凋亡的角度探討熱作用后生精功能變化的機理，分析凋亡相關基因的調(diào)控，將為探索和闡明男性不育的機制提供重要和有價值的資料，為臨床治療某些男性不育、加強勞動保護和探索男性避孕打下基礎。 助頭大學曹學院碩士研兌全畢，必觸戈尸 目的:1)研究皋丸局部熱作用后生精細胞的變化，檢測生精細胞 的凋亡，以此闡明凋亡可作為熱作用后生精細胞變化的一種機制;2) 探索各類生精細胞對熱的敏感性，對熱作用引起生精障礙作更深入研 究;3)研究凋亡相關蛋白Fas和FasL在熱作用后生精細胞的表達情 況，在分子水平上探討熱作用誘導生精細胞凋亡的機制。 材料與方法:雄性SPrague一Dawlcy(SD)大鼠，分籠飼養(yǎng)于標準實 驗房(22℃)，給予規(guī)律光照(12h: 12h)，自由飲食，隨機分熱處理組和 對照組，熱處理組按熱處理后0.5、l、3、6、10、25、50和80d隨機 分成8個亞組(n=6)，每亞組相應設立對照組(n二4)。熱處理組大鼠 陰囊浸于43℃恒溫水浴中30min，對照組浸于22℃水浴中30min。分 別在處理后0.5、l、3、6、10、25、50和80d采取標本，檢測皋丸重 量變化，應用HE染色觀察生精細胞組織學結(jié)構(gòu);采用電鏡、流式細 胞儀和原位末端標記法(TdT一mediated dUDp一X niek end labeling， TUNEL)檢測皋丸局部受熱后生精細胞凋亡情況;應用流式細胞儀和 免疫組化法測定Fas和FasL在熱作用后生精細胞的表達情況。 結(jié)果: 組織學檢測:大鼠翠丸局部受熱后3d出現(xiàn)皋丸重量明顯減輕 (P0.01)，熱作用后以10d一25d翠丸重量減輕更嚴重，50d已開始 恢復，但直到受熱后80d翠丸重量才恢復到基本正常。光鏡下熱作用 后攀丸生精上皮變薄，生精細胞排列紊亂，數(shù)量減少，有大量空泡生 成，出現(xiàn)染色質(zhì)邊集、呈月牙狀，可見多核巨細胞。以10一25d組織 學改變最明顯。50d部分生精小管上皮恢復，到80d生精小管內(nèi)生精 上皮大多恢復正常。 凋亡的檢測:l)電鏡下熱處理各組可見染色質(zhì)濃縮、附著于核邊 緣呈新月形、核染色質(zhì)固縮、斷裂以及凋亡小體出現(xiàn)等生精細胞凋亡 的表現(xiàn)，以熱處理后0.5一6d組更常見;2)流式細胞儀觀察，熱處理 助興大學醫(yī)學院碩哇~班男全軟必討戈尸 各組均有亞單倍體細胞百分率明顯增高(P0.01)，尤以0.5一6d組更 明顯(eontrols:0.5d:2.85士0.66:ld:2.36士0.57;3d:2.71士0.49;6d:2.60 士0 .44;exPeriments:o.sd:23.85士5.59:ld:30.9士1.65;3d:21.55士0.42: “:22.98士1.53);對各類生精細胞DNA含量進行分析表明，熱處理 后0.5一 50d組4C細胞百分比明顯低于對照組(P0.05);6d一SOd組 IC細胞的百分比明顯低于對照組(P0.05);3d一SOd組ZC細胞百分 比明顯高于對照組(P0.05)。3) TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)，各熱處理組生精 細胞凋亡指數(shù)均明顯增多(P0.01)，尤以0.5一6d組更明顯(controls: 0 .sd:0.60士0.01;ld:0.55士0.06;3d:0.47士0.11;6d:0.48士0.11; exPeriments:0.5d:16.75士0.48:ld:27.75士0.85:3d:18士0.91:6d:16.25 士1.11)。熱作用后生精細胞凋亡陽性定位觀察:0.5、1d組凋亡陽性 主要定位在初級精母細胞;3d組出現(xiàn)大量的精子細胞和精子凋亡;6d、 10d組凋亡細胞以大核細胞和精母細胞多見;SOd組多見于精原細胞和 精母細胞;80d組生精上皮大部分恢復，凋亡細胞多見于精原細胞。 Fas蛋白表達:流式細胞儀檢測顯示，熱處理各組Fas蛋白表達 均明顯高于其對照組(P0.01)，熱處理后ld組Fas表達最強。免疫 組化染色顯示:各組生精細胞、支持細胞和間質(zhì)細胞均有陽性表達， 熱處理后各組生精細胞Fas表達均增強。 FasL蛋白表達:流式細胞儀檢測顯示，熱處理后各組FasL蛋白 表達均明顯高于其對照組(P0.05)，熱處理后ld組FasL表達最強。 免疫組化染色顯示:各組生精細胞、支持細胞和間質(zhì)細胞均有陽性表 達，熱處理后各組生精細胞FasL表達均增強。 結(jié)論: l)熱作用引起大鼠翠丸生精上皮
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R363
【圖文】：

對照組皋丸組織透射電鏡照片(EMx7000)

對照組辜丸組織透射電鏡照片(EMx5000)

對照組翠丸組織透射電鏡照片(EMX7000)

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 朱虎;流式細胞儀在睪丸生精過程研究中的應用[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);2001年01期

2 李虹,董強,楊宇如,沈宏,張衛(wèi)東,官鵬;輸精管復通對生精細胞中Bcl-2及Bax基因蛋白表達的影響[J];華西醫(yī)科大學學報;2000年03期

3 張金萍,孔佑華,王鳳琴;高溫對小鼠睪丸生精細胞凋亡影響的實驗研究[J];濟寧醫(yī)學院學報;2000年02期

4 王瑞安,小路武彥,鄭平菊,張遠強,中根一穗;小鼠雄性生殖細胞生后發(fā)育中的程序性死亡[J];解剖學報;1998年04期

5 吳波;細胞凋亡檢測技術(shù)進展及其應用[J];臨床與實驗病理學雜志;1997年03期

6 印洪林,周曉軍,黃宇烽,崔英霞,陸珍鳳;人類凋亡生精細胞超微結(jié)構(gòu)研究[J];中華男科學;2001年01期

7 許多;輸精管結(jié)扎誘發(fā)生精細胞凋亡的研究進展[J];中華男科學;2001年06期

8 張匯泉,朱文華;溫水加熱對大白鼠睪丸組織學影響的定量研究[J];生殖與避孕;1982年04期

9 李宏軍,郭應祿;Fas/FasL系統(tǒng)與睪丸[J];生殖與避孕;2000年01期

10 杜聯(lián)芳,張青萍,劉望彭;診斷超聲與細胞凋亡[J];中華超聲影像學雜志;2000年06期

本文編號：2755050